Trichomonase : corrélations génotypiques et phénotypiques chez les femmes afro-américaines

Malgré de graves conséquences pour la santé publique, sa prévalence généralisée, la résistance croissante aux médicaments et les échecs thérapeutiques, peu a été fait pour étudier le rôle du génotype de T. vaginalis dans la transmission, la virulence, la survenue d'infections mixtes et la propagation de la résistance aux médicaments, principalement en raison de le manque de tests appropriés pour le typage rapide des souches. Les techniques de génotypage utilisées précédemment pour Trichomonas sont inadéquates en raison de problèmes de vitesse d'analyse, de sensibilité et de reproductibilité entre différents laboratoires. Le typage de séquences multilocus (MLST) combine vitesse, sensibilité, portabilité, précision et fiabilité en déterminant les polymorphismes de séquences nucléotidiques (SNP) présents dans de petits fragments d'ADN (300-400 nt) qui sont amplifiés par réaction en chaîne par polymérase (PCR) à partir d'un certain nombre ( généralement 6-7) de gènes domestiques sélectionnés de manière neutre. Le MLST attribue un numéro de fragment d'allèle (AFN) pour chaque SNP unique ou combinaison de SNP présents dans un fragment de gène et les utilise pour identifier des types de séquences uniques (ST) basés sur les combinaisons d'AFN dans la collection de tous les gènes analysés. Le MLST a été largement utilisé pour étudier l'épidémiologie, la structure de la population, la virulence et l'évolution des bactéries pathogènes, mais uniquement pour les champignons chez les eucaryotes, en raison de la difficulté d'interpréter les données du MLST chez les organismes diploïdes. Cependant, T. vaginalis diffère des autres eucaryotes, possédant un ensemble haploïde stable de six chromosomes, et les chercheurs ont développé un système de génotypage MLST pour les isolats cliniques de T. vaginalis. Les données (AFN et ST) générées pour chaque souche de T. vaginalis par le schéma MLST que nous développons seront déposées dans une base de données Internet librement accessible. Ce schéma MLST sera ensuite utilisé pour examiner les relations entre les génotypes de souches et les manifestations cliniques, épidémiologiques et physiologiques de la trichomonase.

La trichomonase se caractérise par un large éventail de présentations cliniques et de séquelles de la maladie. Cette variabilité clinique s'accompagne d'un degré élevé de diversité génétique dans les isolats cliniques de Trichomonas vaginalis, comme nous l'avons démontré à l'origine et d'autres l'ont confirmé. Les chercheurs émettent l'hypothèse que les corrélations entre le génotype et la présentation clinique sont vraies pour la trichomonase et que les isolats de T. vaginalis diffèrent dans leur capacité à la maladie clinique, la gravité, la résistance aux médicaments et les séquelles de la maladie. À l'appui, plusieurs études (10 à 40 patientes) montrent une corrélation statistiquement significative entre la parenté génétique des isolats de T. vaginalis, en utilisant une technique d'amplification aléatoire de l'ADN polymorphe (RAPD), avec leur présentation clinique. Des corrélations entre la gravité de la maladie dans la trichomonase et les propriétés phénotypiques in vitro telles que la cytoadhérence, la cytotoxicité et l'expression de la protéine cystéine protéinase de 30 kilo-daltons (kDa) ont également été rapportées. Des différences significatives dans la cytoadhérence aux monocouches cellulaires, l'expression différentielle des protéines, la phagocytose des cellules cibles, la capacité d'exercer des dommages cytotoxiques sur les cellules cultivées, ainsi que la pathogénicité et la mortalité chez la souris ont été démontrées dans les isolats cliniques de T. vaginalis, indiquant la grande variation des propriétés de virulence présentes dans les isolats de Trichomonas. Les chercheurs ont également démontré jusqu'à quatre fois plus de différences dans l'activité de la cystéine protéase sécrétée entre les isolats cliniques de T. vaginalis en culture. Les preuves accumulées soutiennent fortement une corrélation entre les souches individuelles de T. vaginalis et leur capacité de virulence.

Pour cette étude spécifique, lors de la visite initiale d'inscription/diagnostic, les enquêteurs recueilleront des isolats de T. vaginalis accompagnés d'une évaluation clinique détaillée, d'informations épidémiologiques et des résultats des tests in vitro de résistance aux médicaments. Ces informations permettront aux enquêteurs de déterminer si des souches ou des groupes de souches particuliers (tels que déterminés par le génotypage MLST) sont associés à une infection asymptomatique, à la gravité clinique, à la race du patient, aux échecs de traitement, à la résistance aux médicaments, aux infections mixtes ou aux antécédents sexuels à l'aide d'une analyse univariée et multivariée. . Ceci est important car les associations positives de souches particulières ou de groupes de souches avec ces facteurs, comme les enquêteurs s'attendent à le trouver, nécessiteront des changements dans la façon dont la trichomonase est gérée et traitée en référence aux souches identifiées. Les enquêteurs testeront également indépendamment ces variables pour les corrélations entre elles afin d'identifier les variables ou les combinaisons de variables qui peuvent être associées aux manifestations cliniques de la trichomonase.

Les informations recueillies par les enquêteurs permettront également de mieux comprendre la trichomonase de nombreuses autres manières. Les enquêteurs cultiveront T. vaginalis lors des visites de suivi du test de guérison (TOC) pour déterminer le génotype et déterminer leur résistance aux médicaments afin de distinguer les échecs potentiels du traitement ou la conversion à la résistance aux médicaments (même génotype que la visite d'origine) de la réinfection par un autre contact (génotype différent). Ceci est particulièrement important pour les femmes séropositives car leurs infections à Trichomonas vaginalis sont plus difficiles à guérir et T. vaginalis peut persister, indétectable par culture, pour réapparaître jusqu'à six mois plus tard. Trichomonas vaginalis est détecté lors des visites TOC à des taux beaucoup plus élevés (jusqu'à 36 %) chez les femmes séropositives que chez les femmes séropositives (8 %), la plupart de ces infections étant attribuées à des échecs de traitement. Des rapports récents décrivent des infections à T. vaginalis persistantes et non détectées cultivées 3 et 6 mois après un premier résultat négatif au COT chez des femmes qui ne signalent aucun contact sexuel intermédiaire. Ceci est important car une corrélation entre le génotype de la souche et l'infection persistante identifiera les personnes séropositives nécessitant plusieurs visites TOC, l'utilisation de tests de diagnostic plus sensibles et peut-être des traitements plus longs.