Tricomoniasi: correlazioni genotipo e fenotipo nelle donne afroamericane

Nonostante le gravi conseguenze per la salute pubblica, la sua diffusione diffusa, l'aumento della resistenza ai farmaci e i fallimenti terapeutici, poco è stato fatto per studiare il ruolo del genotipo di T. vaginalis nella trasmissione, nella virulenza, nella comparsa di infezioni miste e nella diffusione della resistenza ai farmaci, principalmente a causa di la mancanza di saggi adatti per la tipizzazione rapida del ceppo. Le tecniche di genotipizzazione precedentemente utilizzate per Trichomonas sono inadeguate a causa di problemi di velocità di analisi, sensibilità e riproducibilità tra diversi laboratori. La tipizzazione della sequenza multilocus (MLST) combina velocità, sensibilità, portabilità, accuratezza e affidabilità determinando i polimorfismi della sequenza nucleotidica (SNP) presenti in piccoli frammenti di DNA (300-400 nt) che vengono amplificati dalla reazione a catena della polimerasi (PCR) da un numero ( di solito 6-7) di geni domestici selezionati in modo neutrale. MLST assegna un numero di frammento allelico (AFN) per ogni SNP univoco o combinazione di SNP presenti in un frammento genico e li utilizza per identificare i tipi di sequenza univoci (ST) basati sulle combinazioni AFN nella raccolta di tutti i geni analizzati. MLST è stato ampiamente utilizzato per studiare l'epidemiologia, la struttura della popolazione, la virulenza e l'evoluzione nei batteri patogeni, ma solo per i funghi tra gli eucarioti, a causa della difficoltà di interpretare i dati MLST negli organismi diploidi. Tuttavia, T. vaginalis differisce da altri eucarioti, in possesso di un set aploide stabile di sei cromosomi, e i ricercatori hanno sviluppato un sistema di genotipizzazione MLST per gli isolati clinici di T. vaginalis. I dati (AFN e ST) generati per ogni ceppo di T. vaginalis dallo schema MLST che sviluppiamo saranno depositati in un database Internet liberamente accessibile. Questo schema MLST verrà quindi utilizzato per esaminare le relazioni tra i genotipi del ceppo e le manifestazioni cliniche, epidemiologiche e fisiologiche della tricomoniasi.

La tricomoniasi è caratterizzata da un ampio spettro di manifestazioni cliniche e sequele della malattia. Questa variabilità clinica è accompagnata da un alto grado di diversità genetica negli isolati clinici di Trichomonas vaginalis, come abbiamo dimostrato in origine e altri hanno confermato. I ricercatori ipotizzano che le correlazioni tra genotipo e presentazione clinica siano vere per la tricomoniasi e che gli isolati di T. vaginalis differiscano nella loro capacità di malattia clinica, gravità, resistenza ai farmaci e sequele della malattia. A sostegno, diversi studi (10-40 pazienti) mostrano una correlazione statisticamente significativa tra la parentela genetica degli isolati di T. vaginalis, utilizzando una tecnica di DNA polimorfico amplificato casuale (RAPD), con la loro presentazione clinica. Sono state riportate anche correlazioni tra la gravità della malattia nella tricomoniasi e le proprietà fenotipiche in vitro come la citoaderenza, la citotossicità e l'espressione della proteina cisteina proteinasi 30 kilo-dalton (kDa). Differenze significative nella citoaderenza ai monostrati cellulari, nell'espressione proteica differenziale, nella fagocitosi delle cellule bersaglio, nella capacità di esercitare danni citotossici sulle cellule in coltura e nella patogenicità e mortalità nei topi sono state dimostrate negli isolati clinici di T. vaginalis, indicando l'ampia variazione nelle proprietà di virulenza presenti negli isolati di Trichomonas. I ricercatori hanno anche dimostrato differenze fino a quattro volte nell'attività della proteasi della cisteina secreta tra gli isolati clinici di T. vaginalis in coltura. Le prove accumulate supportano fortemente una correlazione tra i singoli ceppi di T. vaginalis e la loro capacità di virulenza.

Per questo studio specifico, durante la visita iniziale di arruolamento/diagnosi gli investigatori raccoglieranno isolati di T. vaginalis accompagnati da una valutazione clinica dettagliata, informazioni epidemiologiche e i risultati dei test in vitro di resistenza ai farmaci. Queste informazioni consentiranno agli investigatori di determinare se particolari ceppi o gruppi di ceppi (come determinato dalla genotipizzazione MLST) sono associati a infezione asintomatica, gravità clinica, razza del paziente, fallimenti terapeutici, resistenza ai farmaci, infezioni miste o storia sessuale utilizzando analisi univariate e multivariate . Ciò è significativo perché le associazioni positive di particolari ceppi o gruppi di ceppi con questi fattori, come i ricercatori si aspettano di trovare, richiederanno cambiamenti nel modo in cui la tricomoniasi viene gestita e trattata con riferimento ai ceppi identificati. Gli investigatori testeranno anche in modo indipendente queste variabili per le correlazioni tra loro per identificare variabili o combinazioni di variabili che possono essere associate a manifestazioni cliniche di tricomoniasi.

Le informazioni raccolte dagli investigatori consentiranno anche una migliore comprensione della tricomoniasi in molti altri modi. Gli investigatori coltiveranno T. vaginalis durante le visite di follow-up del test di cura (TOC) al genotipo e determineranno la loro resistenza ai farmaci al fine di distinguere potenziali fallimenti terapeutici o conversione alla resistenza ai farmaci (stesso genotipo della visita originale) dalla reinfezione da parte di un altro contatto (genotipo diverso). Ciò è particolarmente significativo per le donne sieropositive poiché le loro infezioni da Trichomonas vaginalis sono più difficili da curare e T. vaginalis può persistere, non rilevabile dalla coltura, solo per riemergere fino a sei mesi dopo. Trichomonas vaginalis viene rilevato alle visite TOC a tassi molto più elevati (fino al 36%) nelle donne HIV+ rispetto alle donne HIV- (8%) con la maggior parte di queste infezioni attribuite a fallimenti terapeutici. Rapporti recenti descrivono infezioni da T. vaginalis persistenti e non rilevate coltivate 3 e 6 mesi dopo un iniziale risultato TOC negativo in donne che non segnalano contatti sessuali intermedi. Ciò è significativo in quanto una correlazione del genotipo del ceppo con l'infezione persistente identificherà gli individui HIV+ che necessitano di più visite TOC, l'uso di test diagnostici più sensibili e forse cicli di trattamento più lunghi.