O efeito do nitrato dietético na pressão arterial, sensibilidade à insulina e função vascular no diabetes tipo 2

Ensaio duplo-cego, randomizado, controlado por placebo, com design cruzado comparando o efeito do suco de beterraba (rico em nitrato) com placebo (suco de beterraba sem nitrato) na pressão arterial, função endotelial e sensibilidade à insulina em indivíduos com diabetes tipo 2. Indivíduos saudáveis ​​de mesma idade terão a pressão arterial medida.

Plano de Investigações: Medições dos resultados do estudo.

Pressão arterial medida usando monitoramento ambulatorial da pressão arterial (Spacelabs) por 24 horas.

Taxa de excreção de albumina na urina: em amostras durante a noite usando técnicas padrão de radioimunoensaio.

A excreção de nitrato na urina será usada como medida de adesão, e será medida usando um ensaio de HPLC recentemente desenvolvido no St. Luke's no laboratório do Professor Winyard.

Função endotelial microvascular avaliada por iontoforese de um vasodilatador endotelial dependente (acetilcolina, ACh) e independente (nitroprussiato de sódio, SNP) e monitoramento da resposta de perfusão usando Laser Doppler Perfusion Imaging coeficiente de variação intraindividual é de 12% para Ach e 18,7% para SNP.

Hiperemia reativa pós-oclusiva: Uma sonda de laser Doppler será anexada à superfície interna do antebraço ou dorso do pé e o fluxo sanguíneo será medido por 5 minutos. Em seguida, um manguito de pressão arterial será rapidamente inflado para 200 mmHg por 5 minutos para obstruir o fluxo sanguíneo. No final da oclusão de 4 minutos, o manguito será rapidamente esvaziado e o fluxo sanguíneo registrado por 10 minutos após a liberação. Este procedimento estimula a dilatação dos microvasos com consequente aumento do fluxo sanguíneo. A análise envolve investigação detalhada sobre a forma da curva de fluxo sanguíneo para categorizá-la em uma das 3 opções: normal; pico dominante inicial e pico não dominante inicial.

Espectroscopia de reflectância óptica (ORS) ORS é uma técnica não invasiva que mede diretamente as alterações no volume sanguíneo e a oxigenação da microcirculação da pele. A luz visível que passa pela pele é atenuada em parte pela concentração de oxi e deoxihemoglobina. Assumindo que a atenuação da luz por dispersão permanece constante, as alterações na concentração de oxi e desoxihemoglobina podem ser calculadas a partir das alterações medidas na atenuação da luz em diferentes comprimentos de onda à medida que ela viaja pela pele.

Hiperemia Máxima da Pele (HM): Uma área do aspecto dorsal do pé direito e do aspecto ventral do antebraço, livre de veias visíveis ou lesões cutâneas, será aquecida a uma temperatura de 42°C por 30 minutos com um pequeno aquecedor de latão de 1 cm de diâmetro (Moor Instruments, Axminster, Devon, U.K.) e a resposta máxima do fluxo sanguíneo é medida usando técnicas de laser Doppler (ponto único ou laser Doppler perfusion imager. O coeficiente de variação intraindividual médio para a medição do fluxo sanguíneo máximo é de 6,6%, determinado a partir de 2 indivíduos em 5 ocasiões separadas. Usando esta técnica, os investigadores observaram anteriormente alterações na hiperemia cutânea máxima com diabetes tipo 2 e em mulheres com história prévia de diabetes gestacional.

Espectroscopia de infravermelho próximo (NIRS). O NIRS é uma técnica não invasiva que avalia a alteração no volume sanguíneo e a oxigenação da microcirculação em diferentes leitos de tecidos, incluindo músculos e cérebro. leve. Como o infravermelho próximo (760 - 840 nm) tem um comprimento de onda maior que a luz visível, ele se espalha menos e, portanto, tem uma maior profundidade de penetração, o que permite avaliar a oxigenação no músculo ou no cérebro onde será usado em relação à nossa avaliação de cognição.

. A sensibilidade à insulina será medida no final das duas fases de tratamento usando um grampo isoglicêmico hiperinsulinêmico (uma versão modificada do grampo euglicêmico hiperinsulinêmico). Uma infusão de taxa constante e iniciada de insulina solúvel (2,0 mukg por min) será administrada por 180 minutos e uma infusão de taxa variável de glicose a 20% administrada para manter a isoglicemia. O ponto de ajuste isoglicêmico será determinado tomando a média de duas medições de glicose no sangue em jejum que serão feitas no dia do teste vascular e antes do clamp. A infusão de insulina será preparada em 45 ml de NaCl 0,9% e 5 ml de sangue do paciente para evitar a adsorção de insulina em superfícies plásticas. Em intervalos de 5 min, amostras de 2 ml de sangue serão coletadas de uma veia dorsal da mão. Durante o estado estacionário, M é calculado a partir da taxa de infusão de glicose e da concentração sérica de insulina de acordo com uma fórmula matemática simples.

Vasodilatação mediada por fluxo usada como medida da produção de óxido nítrico endotelial a um estímulo padrão (cisalhamento). Conforme descrito anteriormente e seguindo as diretrizes de consenso, o endotélio vascular periférico dependente (ou seja, A vasodilatação mediada por NO) em resposta à hiperemia reativa do antebraço será determinada medindo a alteração do diâmetro da artéria braquial usando ultrassom de modo B de matriz linear e software de detecção de borda automatizada (MIA, Iowa, EUA). A hiperemia reativa será induzida pela oclusão do fluxo sanguíneo para a parte superior do antebraço usando um manguito inflado a 250 mmHg por 5 minutos, seguido de desinsuflação rápida. O fluxo sanguíneo durante a hiperemia reativa será medido usando um sistema de ultrassom Doppler para o cálculo e análise do estímulo da taxa de cisalhamento. A vasodilatação independente do endotélio vascular (controle interno) será determinada pela dilatação da artéria braquial para nitroglicerina sublingual (0,4 mg). O coeficiente de variação intraindividual para dilatação mediada por fluxo é de 8,1%.

Teste de VO2 máximo: Testes de exercício de bicicleta estática serão realizados para determinar a cinética do consumo de oxigênio durante o exercício submáximo e o consumo máximo de oxigênio usando procedimentos padrão. Durante os testes de exercício, a espectroscopia de infravermelho próximo será usada para medir as mudanças na oxi, desoxi e hemoglobina total do músculo que acompanham o exercício.

Teste de função cognitiva: Usando o programa E-prime (Psychology Software Tools inc), uma série de testes de função cognitiva de 30 minutos será desenvolvida. O paciente completará esses testes simples em um laptop durante o período de aclimatação

As amostras plasmáticas de Nitrito e Nitrato Desproteinizado serão analisadas quanto à concentração de nitrito e nitrato usando um analisador de óxido nítrico Sievers (Sievers NOA 280i, Analytix Ltd, Durham, Reino Unido) e uma modificação de nossa técnica de quimioluminescência anterior