Análise Molecular em Tempo Real de Câncer de Mama Recebendo Quimioterapia Neoadjuvante (NEO-R)

O câncer de mama (CM) é um importante problema de saúde pública na França, com incidência crescente, estimada em ~60.000 novos casos em 2017 e 12.000 mortes. Apesar da melhora da sobrevida nos últimos anos, a resistência à quimioterapia (QT) continua sendo um desafio primordial no BC: os mecanismos moleculares permanecem pouco conhecidos e as intervenções atuais são inadequadas para atingir a quimiorresistência. A quimioterapia neoadjuvante (NAC) agora é cada vez mais usada em mulheres com BC operável, mas agressivo, como tumor triplo negativo (TN) ou HER2+ (Pusztai et al, Lancet Oncol 2019). Oferece pelo menos três vantagens: i) redução do tamanho do tumor autorizando a cirurgia conservadora, ii) adaptação da terapia sistêmica adjuvante de acordo com a resposta patológica, com administração de capecitabina em pacientes com NT (Masuda N. et al, N Engl J Med. 2017) e T-DM1 em pacientes HER2+ (von Minckwitz G et al., N Engl J Med. 2019) na ausência de resposta patológica completa (pCR), e iii) fornecer recursos para investigar os mecanismos moleculares da quimiorresistência. O atual regime NAC padrão é baseado em uma associação sequencial de antraciclina e taxano (e trastuzumabe se HER2+) (Huober & von Minckwitz, Breast Care 2011) e a obtenção de pCR, definida como a ausência de câncer invasivo residual na avaliação patológica de o espécime operatório (espécime de mama ressecado e linfonodos ipsilaterais amostrados (ou seja, ypT0/Tis ypN0 no sistema de estadiamento AJCC) é uma característica de bom prognóstico; os pacientes sem pCR têm alto risco de recaída (≈50% do TN e subtipos HER2+).

O principal gargalo na melhoria da eficiência do tratamento para esses pacientes é a identificação de candidatos efetivamente envolvidos na resistência ao NAC, sua validação em modelos relevantes e preditivos e sua detecção a partir de marcadores substitutos. Evidentemente, a busca de alterações moleculares representadas diferencialmente nas amostras pré-NAC entre os pacientes resistentes (sem pCR) versus sensíveis (pCR), ou entre as amostras pareadas pós- versus pré-NAC pode revelar candidatos envolvidos na resistência ("inata " e "adquired stable" respectivamente), mas ignora as alterações que ocorrem durante o NAC que podem ser reversíveis ("adquired reversible") e não identificadas na peça ressecada (Echeverria GV, Sci Transl Med 2019), mas apenas identificáveis ​​por análise de amostras seriadas durante regime NAC, difícil e traumático na prática clínica.

O presente projeto visa identificar candidatos robustos para resistência a medicamentos em pacientes com BC elegíveis para NAC. Sua originalidade reside na combinação de três abordagens prospectivas diferentes e complementares: das análises moleculares de biópsias coletadas antes e depois da NAC, dos Organoides Derivados do Paciente (PDO) in vitro que mimetizam a resposta do paciente à NAC e das Células Tumorais Circulantes (CTCs) ) isolado antes/durante/depois da NAC. Este projeto combinará as tecnologias mais avançadas (sequenciamento de RNA e DNA de pequena quantidade de material biológico, subconjuntos raros/isolamento de célula única e análises multi-ômicas) com modelos inovadores (teste de drogas em PDO de mama, identificação de drogas reversíveis mudanças induzidas) e combinação inteligente de marcadores robustos envolvidos na resistência aos medicamentos que foram todos estabelecidos e estão sendo executados em laboratório (ver Parte B). Os dois últimos pontos só recentemente se tornaram viáveis ​​graças a dois avanços tecnológicos recentes: culturas de PDO de câncer de mama (Sachs N, et al. Célula. 2018) e isolamento e caracterização de CTCs (Gkountela S, et al. Célula. 2019). Resumidamente, os investigadores usarão biópsias seriadas de tumores e amostras de sangue de uma coorte de pacientes com BC tratados com NAC (Figura 1). As biópsias do tumor serão coletadas antes e depois do NAC. Eles serão analisados ​​pelas abordagens RNA-seq e Target-NGS (exoma) para capturar as diferenças resultantes do NAC em pacientes com diferentes respostas patológicas. Eles também serão usados ​​para gerar modelos BC PDO. Os modelos PDO preditivos para resposta NAC serão explorados como modelos relevantes para investigar a resistência NAC. Especificamente, os investigadores usarão esses modelos para observar os mecanismos de resistência induzidos por drogas "adquiridas reversíveis" in vitro (ou seja, detectáveis ​​apenas durante a exposição à droga). Amostras de sangue serão coletadas antes, durante e após o NAC para analisar CTCs, e visam identificar mecanismos de resistência induzidos por drogas "adquiridos reversíveis" ex vivo, que os investigadores podem não detectar apenas com as amostras NAC antes/depois.

Pelo que sabemos, esta é a primeira vez que essas três abordagens inovadoras serão usadas juntas para investigar em profundidade o tópico "resistência" em pacientes que recebem NAC. A força desta combinação é antecipar situações diferentes - não mutuamente exclusivas - que podem ocorrer ("inata", "adquirida estável" e/ou "reversível" resistência induzida por drogas). Cada abordagem fornecerá informações originais, precisas e específicas que contribuirão para construir uma resposta mais completa a essa questão do que os dados dispersos e incompletos atualmente disponíveis na literatura.