Immunoscore som en prognostisk markör för patienter med kolorektal cancer (IMMUCOL)

Huvudsyftet är att bedöma effekten av immunpoängen i den kliniska praktiken. För detta ändamål kommer immunparametern (CD3, CD8, CD45RO) för kolorektal cancer (stadium I-IV) att utvärderas prospektivt genom en stor multicenterstudie. 400 patienter med CRC stadium I till IV kommer att inkluderas (6 centra för inkludering; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Antalet patienter som ska inkluderas har beräknats utifrån en inklusionsperiod på 24 månader, en uppföljning på 3 år (en insamling av data under 4:e och 5:e året planeras med en medfinansiering), en förväntad händelsefrekvens på 20 %, ett prognostiskt värde för immunparametern liknande det som observerades i den retrospektiva studien av 399 patienter med CRC (*1) och en teststyrka på 90 %. Under både initial behandling och uppföljning kommer alla terapeutiska procedurer att registreras (kirurgi, strålbehandling, kemoterapi...). Data kommer att samlas in från klinisk undersökning, radiologiska undersökningar och biologiska tester som vanligtvis utförs under en sjukhusvistelse för kolorektal cancer: Fullständig klinisk undersökning och förhör om förekomsten av personlig och familjehistoria av CRC, adenom och andra cancerformer; Abdominal ultraljud, lungröntgen; Datortomografi (CT) och magnetisk resonanstomografi (MRT) enligt läkarens krav; Standardlaboratorietester och blodanalys för karcinoembryonalt antigen (CEA); Den histopatologiska studien av tumören som innehåller status för de kirurgiska excisionsmarginalerna, den histologiska typen av cancer, nivån av parietal invasion, antalet undersökta lymfkörtlar och antalet metastaserande lymfkörtlar, enligt TNM-klassificeringen. Patienterna kommer att följas upp var 3:e månad under de första 2 åren och var 6:e ​​månad under resten av uppföljningsperioden, enligt rekommendation. Varje patient kommer att följas upp till 5 år. Kliniska, biologiska och radiologiska data kommer att registreras i en specifik CRF. Verifiering av inkludering och övervakning av data kommer att utföras av HEGP Clinical Research Unit (URC HEGP) och huvudutredaren. En plan för datahantering kommer att byggas upp i linje med övervakningen. Ett frågeformulär kommer också att skickas till patienterna var sjätte månad i fem år. Detta frågeformulär byggdes av Pr F Pagès och av psykologer och psykiatriker för att söka efter information om (i) förekomsten av en immunsjukdom (som allergi, autoimmunitet, inflammatorisk process) och (ii) patientens psykologiska status (t.ex. depression). Efter övervakning kommer all data att lagras med hjälp av ett dubbelt datainmatningssystem i en MS-Access-databas designad av URC-HEGP och i TME.dB-databasen som skapats av huvudutredarens team. De två databaserna kommer att slås samman och den slutliga databasen kommer att frysas för statistisk analys. Provberedning: Patologen vid varje center kommer att välja ett tumörblock som innehåller tumörens kärna och den invasiva marginalen. Detta tumörblock är en del av de tumörprover som rutinmässigt behandlas av avdelningen för patologi för diagnos. tre vävnadssektioner på 4 mikron kommer att göras och deponeras på ett objektglas för att utföra immunhistokemin. Fyra vävnadssektioner på 4 mikron kommer att göras och deponeras på ett Eppendorf-låsrör för att utföra de genetiska analyserna. Anonyma patientnamn på objektglasen och rören kommer att tillhandahållas med hjälp av ett kodnummer och patientens initialer. Om biopsier för diagnostiska ändamål är tillgängliga (dvs. de som utförs för patienterna under deras initiala sjukhusvistelse (50 % av fallen), kommer A vävnadssnitt av varje biopsi att göras. Alla objektglas och rör kommer att skickas per post till HEGP-plattformen för analys av immuninfiltratet och till biologiavdelningen för de genetiska analyserna. Immunpoängen kommer att bestämmas med hjälp av följande steg: Immunfärgningar för CD3, CD8, CD45RO på Benchmark XT automate; Skanning av immunfärgningar på Hamamatsu-skanner: Kvantifiering av immunpopulationer i specifika tumörområden (kärnan och den invasiva marginalen) med en dedikerad bildanalysmodul baserad på igenkänning av histologiska strukturer anpassade till kolorektal cancer. Denna modul har utvecklats av vår grupp i anslutning till företaget Definiens. En halvautomatisk procedur möjliggör kvantifiering av färgade celler i varje tumörregion. Varje region är uppdelad i brickor med 800 mikron sida (500 till 700 brickor analyserade per tumör). Tätheten för varje markör beräknas med hjälp av medeldensiteten för de tre plattorna som är mest infiltrerade i varje tumörregion. En kategorisering i hög densitet (Hi) eller låg (Lo) för varje markör i varje tumörområde av intresse kommer att utföras. Denna kategorisering görs genom att jämföra den observerade densiteten med den optimala cut-off-densiteten (min p-värde) som vi tidigare bestämt för DFS och OS i en retrospektiv studie av 250 CRC. Genetiska analyser: Rören som innehåller sektionerna för genetiska analyser av patienter med informativt samtycke undertecknat för genetisk undersökning kommer att överföras till Institutionen för biologi, Hôpital Européen Georges Pompidou. Procentandelen tumörceller för varje prov kommer att bestämmas av en patolog (baserat på en H&E-utvärdering; mindre än 10 %, 10-20 %, 20-50 %, upp till 50 % tumörceller) och DNA-extraktionen kommer att utföras . Genetisk undersökning kommer att omfatta MSI-status, närvaron av en K-Ras och BRAF-mutation