결장직장암 환자의 예후 지표로서의 면역점수 (IMMUCOL)

주요 목표는 임상 실습에서 면역 점수의 영향을 평가하는 것입니다. 이를 위해 대규모 다기관 연구를 통해 대장암(I기-IV기)의 면역 매개변수(CD3, CD8, CD45RO)를 전향적으로 평가할 예정이다. 400명의 CRC 1기에서 4기까지의 환자가 포함될 것입니다(포함을 위한 6개 센터: Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). 포함할 환자의 수는 24개월의 포함 기간, 3년의 후속 조치(공동 자금 지원으로 4년차 및 5년차 데이터 수집 계획)를 기준으로 계산되었습니다. 20%의 사건 발생률, 399명의 CRC 환자에 대한 후향적 연구에서 관찰된 것과 유사한 면역 매개변수의 예후 값(*1) 및 검정력 90%. 초기 관리 및 후속 조치 동안 모든 치료 절차(수술, 방사선 요법, 화학 요법…)가 등록됩니다. 데이터는 결장직장암으로 입원하는 동안 일반적으로 수행되는 임상 검사, 방사선 검사 및 생물학적 검사에서 수집됩니다. 전체 임상 검사 및 CRC, 선종 및 기타 암의 개인 및 가족력 존재에 대한 질문; 복부 초음파, 흉부 엑스레이; 임상의의 요구에 따른 컴퓨터 단층촬영(CT) 및 자기공명영상(MRI); 암배아 항원(CEA)에 대한 표준 실험실 검사 및 혈액 분석; TNM 분류에 따른 외과적 절제연의 상태, 암의 조직학적 유형, 정수리 침범 정도, 검사한 림프절의 수 및 전이성 림프절의 수를 포함하는 종양의 조직병리학적 연구. 권장되는 대로 환자는 처음 2년 동안 3개월마다, 나머지 추적 기간 동안 6개월마다 후속 조치를 받게 됩니다. 각 환자는 최대 5년 동안 추적됩니다. 임상, 생물학적 및 방사선학적 데이터는 특정 CRF에 등록됩니다. 포함 확인 및 데이터 모니터링은 HEGP 임상 연구 부서(URC HEGP) 및 주임 조사관이 수행합니다. 모니터링에 따라 데이터 관리 계획이 수립됩니다. 또한 설문지는 5년 동안 6개월마다 환자에게 발송됩니다. 이 설문지는 Pr F Pagès와 심리학자 및 정신과 의사가 (i) 면역 장애(예: 알레르기, 자가 면역, 염증 과정)의 존재 및 (ii) 환자의 심리적 상태(예: 우울증). 모니터링 후 모든 데이터는 URC-HEGP가 설계한 MS-Access 데이터베이스와 책임 조사 팀이 만든 TME.dB 데이터베이스에 이중 데이터 입력 시스템을 사용하여 저장됩니다. 2개의 데이터베이스가 병합되고 최종 데이터베이스는 통계 분석을 위해 동결됩니다. 샘플 준비: 각 센터의 병리학자는 종양의 중심부와 침윤성 마진을 포함하는 종양 블록을 선택합니다. 이 종양 블록은 진단을 위해 병리과에서 일상적으로 처리하는 종양 샘플의 일부입니다. 4미크론의 3개 조직 섹션을 만들고 면역조직화학을 수행하기 위해 유리 슬라이드에 증착합니다. 4미크론의 4개 조직 절편을 만들고 유전 분석을 수행하기 위해 Eppendorf 안전 잠금 튜브에 보관합니다. 슬라이드와 튜브의 환자 이름은 코드 번호와 환자의 이니셜을 사용하여 익명으로 제공됩니다. 진단 목적의 생검이 가능한 경우(즉, 초기 입원 동안 환자를 위해 수행된 것(사례의 50%), 각 생검의 조직 절편이 수행됩니다. 모든 슬라이드와 튜브는 면역 침윤 분석을 위해 HEGP 플랫폼으로, 유전자 분석을 위해 생물학 부서로 우편으로 발송됩니다. 면역점수는 다음 단계를 사용하여 결정됩니다: Benchmark XT 자동화에서 CD3, CD8, CD45RO에 대한 면역염색; Hamamatsu 스캐너에서 면역염색 스캐닝: 대장암에 적응된 조직학적 구조 인식을 기반으로 전용 이미지 분석 모듈을 사용하여 특정 종양 영역(핵심 및 침윤성 마진)의 면역 집단을 정량화합니다. 이 모듈은 Definiens 회사와 관련하여 우리 그룹에서 개발했습니다. 반자동 절차를 통해 각 종양 영역에서 염색된 세포를 정량화할 수 있습니다. 각 영역은 측면이 800 마이크론인 타일로 나뉩니다(종양당 500~700 타일 분석). 각 마커의 밀도는 각 종양 부위에서 가장 많이 침윤된 3개 타일의 평균 밀도를 사용하여 계산됩니다. 관심 있는 각 종양 영역의 각 마커에 대해 고밀도(Hi) 또는 저밀도(Lo)로 분류가 수행됩니다. 이 분류는 250 CRC의 후향적 연구에서 이전에 DFS 및 OS에 대해 결정한 최적 컷오프 밀도(최소 p 값 접근법)와 관찰된 밀도를 비교하여 수행됩니다. 유전자 분석: 유전자 조사를 위해 동의서에 서명한 환자의 유전자 분석 섹션이 포함된 튜브는 유럽 조르주 퐁피두 병원의 생물학과로 이전됩니다. 각 표본의 종양 세포의 %는 병리학자에 의해 결정되고(H&E 평가에 근거; 10% 미만, 10-20%, 20-50%, 최대 50% 종양 세포) DNA 추출이 수행됩니다. . 유전자 조사는 MSI 상태, K-Ras 및 BRAF 돌연변이의 존재로 구성됩니다.