Immunoscore jako marker prognostyczny dla pacjentów z rakiem jelita grubego (IMMUCOL)

Głównym celem jest ocena wpływu immunoscore na praktykę kliniczną. W tym celu parametr immunologiczny (CD3, CD8, CD45RO) raka jelita grubego (stadium I-IV) zostanie oceniony prospektywnie w ramach dużego, wieloośrodkowego badania. Uwzględnionych zostanie 400 pacjentów z CRC w stadium od I do IV (6 ośrodków włączenia; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Liczbę pacjentów do włączenia obliczono na podstawie 24-miesięcznego okresu włączenia, 3-letniej obserwacji (planowane jest zbieranie danych w 4 i 5 roku z dofinansowaniem), oczekiwanej częstość zdarzeń 20%, wartość prognostyczna parametru immunologicznego zbliżona do obserwowanej w badaniu retrospektywnym 399 pacjentów z CRC (*1) i moc testu 90%. Zarówno w trakcie wstępnego leczenia, jak i w okresie obserwacji, wszystkie procedury terapeutyczne będą rejestrowane (zabiegi chirurgiczne, radioterapia, chemioterapia…). Dane będą zbierane z badania klinicznego, badań radiologicznych i badań biologicznych, które są zwykle wykonywane podczas hospitalizacji z powodu raka jelita grubego: Pełne badanie kliniczne i wywiad osobisty i rodzinny dotyczący CRC, gruczolaków i innych nowotworów; USG jamy brzusznej, RTG klatki piersiowej; Tomografia komputerowa (CT) i rezonans magnetyczny (MRI) wg wskazań lekarza; Standardowe testy laboratoryjne i badanie krwi na obecność antygenu rakowo-płodowego (CEA); Badanie histopatologiczne guza zawierające stan marginesów wycięcia chirurgicznego, typ histologiczny nowotworu, stopień naciekania ciemieniowego, liczbę zbadanych węzłów chłonnych oraz liczbę przerzutowych węzłów chłonnych, zgodnie z klasyfikacją TNM. Pacjenci będą kontrolowani co 3 miesiące przez pierwsze 2 lata i co 6 miesięcy przez resztę okresu obserwacji, zgodnie z zaleceniami. Każdy pacjent będzie obserwowany przez okres do 5 lat. Dane kliniczne, biologiczne i radiologiczne zostaną zarejestrowane w określonym CRF. Weryfikacja inkluzji i monitorowanie danych będą prowadzone przez Jednostkę ds. Badań Klinicznych HEGP (URC HEGP) i głównego badacza. Wraz z monitorowaniem zostanie opracowany plan zarządzania danymi. Kwestionariusz będzie również wysyłany do pacjentów co pół roku przez pięć lat. Kwestionariusz ten został stworzony przez Pr F Pagèsa oraz przez psychologów i psychiatrów w celu wyszukania informacji dotyczących (i) obecności zaburzenia immunologicznego (takiego jak alergia, autoimmunizacja, proces zapalny) oraz (ii) stanu psychicznego pacjentów (np. depresja). Po przeprowadzeniu monitoringu wszystkie dane będą przechowywane z wykorzystaniem podwójnego systemu wprowadzania danych w opracowanej przez URC-HEGP bazie danych MS-Access oraz w bazie TME.dB stworzonej przez zespół kierownika projektu. Te 2 bazy danych zostaną połączone, a ostateczna baza danych zostanie zamrożona do celów analizy statystycznej. Przygotowanie próbki: Patolog z każdego ośrodka wybierze blok guza zawierający rdzeń guza i margines inwazyjny. Ten blok guza jest częścią próbek guza rutynowo przetwarzanych przez wydział patologii w celu postawienia diagnozy. zostaną wykonane trzy skrawki tkanki o grubości 4 mikronów i umieszczone na szkiełku podstawowym w celu wykonania immunohistochemii. Zostaną wykonane cztery skrawki tkanki o grubości 4 mikronów i umieszczone w probówkach z bezpiecznym zamknięciem Eppendorf w celu przeprowadzenia analiz genetycznych. Anonimowe nazwiska pacjentów na szkiełkach i probówkach zostaną podane przy użyciu numeru kodu i inicjałów pacjenta. Jeżeli dostępne są biopsje do celów diagnostycznych (tj. te wykonywane dla pacjentów podczas ich pierwszej hospitalizacji (50% przypadków), Z każdej biopsji zostanie wykonany skrawek tkanki. Wszystkie szkiełka i probówki zostaną przesłane pocztą na platformę HEGP w celu analizy nacieku immunologicznego oraz do działu biologii w celu przeprowadzenia analiz genetycznych. Wynik immunologiczny zostanie określony przy użyciu następujących kroków: Immunobarwienie dla CD3, CD8, CD45RO na automacie Benchmark XT; Skanowanie immunobarwienia na skanerze Hamamatsu: Kwantyfikacja populacji immunologicznych w określonych obszarach guza (rdzeń i margines inwazyjny) za pomocą dedykowanego modułu analizy obrazu opartego na rozpoznawaniu struktur histologicznych dostosowanych do raka jelita grubego. Moduł ten został opracowany przez naszą grupę w powiązaniu z firmą Definiens. Półautomatyczna procedura pozwala na ilościową ocenę wybarwionych komórek w każdym regionie guza. Każdy region jest podzielony na płytki o boku 800 mikronów (od 500 do 700 analizowanych płytek na guz). Gęstość każdego markera oblicza się stosując średnią gęstość trzech płytek najbardziej naciekających w każdym regionie guza. Zostanie przeprowadzona kategoryzacja na wysoką gęstość (Hi) lub niską (Lo) dla każdego markera w każdym interesującym regionie guza. Ta kategoryzacja jest dokonywana poprzez porównanie obserwowanej gęstości z optymalną gęstością odcięcia (podejście do wartości min. p), które wcześniej ustaliliśmy dla DFS i OS w retrospektywnym badaniu 250 CRC. Analizy genetyczne: Probówki zawierające skrawki do analiz genetycznych pacjentów ze świadomą zgodą podpisaną na badania genetyczne zostaną przekazane do Wydziału Biologii Hôpital Européen Georges Pompidou. Procent komórek nowotworowych w każdej próbce zostanie określony przez patologa (na podstawie oceny H&E; mniej niż 10%, 10-20%, 20-50%, do 50% komórek nowotworowych) i zostanie przeprowadzona ekstrakcja DNA . Badanie genetyczne obejmie status MSI, obecność mutacji K-Ras i BRAF