Az Immunoscore mint prognosztikus marker vastag- és végbélrákos betegek számára (IMMUCOL)

A fő cél az immunoscore hatásának felmérése a klinikai gyakorlatban. Ennek érdekében a vastag- és végbélrák (I-IV. stádium) immunparamétereit (CD3, CD8, CD45RO) prospektív módon értékelik egy nagy multicentrikus vizsgálaton keresztül. 400 CRC I–IV. stádiumban szenvedő beteget vonnak be (6 felvételi központ; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). A bevonandó betegek számát 24 hónapos bevonási időszak, 3 éves követés alapján (társfinanszírozással 4. és 5. év alatti adatgyűjtést tervezzük), várható eseményarány 20%, az immunparaméter prognosztikai értéke hasonló a 399 CRC-s beteg retrospektív vizsgálatánál megfigyelthez (*1), és a teszt 90%-os teljesítménye. Mind a kezdeti kezelés, mind az utánkövetés során minden terápiás eljárást (műtét, sugárterápia, kemoterápia…) regisztrálnak. Adatokat gyűjtenek a klinikai vizsgálatokból, radiológiai vizsgálatokból és biológiai tesztekből, amelyeket általában végbélrák miatti kórházi kezelés során végeznek: Teljes klinikai vizsgálat és kikérdezés a CRC, adenomák és egyéb rákos megbetegedések személyes és családi anamnézisében; Hasi ultrahang, mellkas röntgen; Számítógépes tomográfia (CT) és mágneses rezonancia képalkotás (MRI) a klinikus igényei szerint; Szabványos laboratóriumi vizsgálatok és vérvizsgálat karcinoembrionális antigén (CEA) kimutatására; A daganat hisztopatológiai vizsgálata, amely tartalmazza a műtéti kivágási szélek állapotát, a rák szövettani típusát, a parietális invázió mértékét, a vizsgált nyirokcsomók számát és az áttétes nyirokcsomók számát a TNM besorolás szerint. A betegeket az első 2 évben 3 havonta, a további követési időszakban pedig 6 havonta követik, az ajánlásnak megfelelően. Minden beteget 5 évig követnek nyomon. A klinikai, biológiai és radiológiai adatokat egy adott CRF-be kell regisztrálni. A zárványok ellenőrzését és az adatok monitorozását a HEGP Klinikai Kutatási Egység (URC HEGP) és a vezető kutató végzi. A monitoringgal összhangban adatkezelési terv készül. Öt éven keresztül félévente kérdőívet is küldenek a betegeknek. Ezt a kérdőívet Pr F Pagès és pszichológusok és pszichiáterek állította össze, hogy információkat keressen (i) immunrendszeri rendellenesség (például allergia, autoimmunitás, gyulladásos folyamat) jelenlétéről és (ii) a betegek pszichés állapotáról (pl. depresszió). A monitorozás után az összes adatot kettős adatbeviteli rendszerrel tároljuk az URC-HEGP által tervezett MS-Access adatbázisban és a főkutató csapata által létrehozott TME.dB adatbázisban. A 2 adatbázist összevonják, a végleges adatbázist pedig statisztikai elemzés céljából lefagyasztják. Mintaelőkészítés: Minden központ patológusa kiválaszt egy tumorblokkot, amely tartalmazza a daganat magját és az invazív szegélyt. Ez a tumorblokk a Patológiai Osztály által diagnosztizálás céljából rutinszerűen feldolgozott daganatminták része. három 4 mikronos szövetmetszetet készítenek, amelyeket üveglemezre helyeznek az immunhisztokémia elvégzéséhez. Négy 4 mikronos szövetmetszetet készítenek, amelyeket egy Eppendorf biztonságos zárcsőbe helyeznek a genetikai elemzések elvégzéséhez. A tárgylemezeken és csövekben a névtelen páciensneveket kódszámmal és a páciens kezdőbetűivel kell megadni. Ha rendelkezésre állnak diagnosztikai célú biopsziák (pl. azokat, amelyeket a betegeknek a kezdeti kórházi kezelés során végeznek (az esetek 50%-a), minden biopsziából szövetmetszetek készülnek. Minden tárgylemezt és csövet postai úton elküldenek a HEGP platformra az immuninfiltrátum elemzésére, valamint a Biológiai osztályra a genetikai elemzések elvégzésére. Az immunscore meghatározása a következő lépésekkel történik: A CD3, CD8, CD45RO immunfestése a Benchmark XT automatán; Az immunfestések szkennelése Hamamatsu szkennerrel: Az immunpopulációk számszerűsítése meghatározott daganatos területeken (a mag és az invazív szél) egy dedikált képelemző modullal, amely a vastag- és végbélrákhoz adaptált szövettani struktúrák felismerésén alapul. Ezt a modult csoportunk a Definiens céggel kapcsolatban fejlesztette ki. Egy félautomata eljárás lehetővé teszi a festett sejtek mennyiségi meghatározását az egyes tumorrégiókban. Minden régiót 800 mikronos oldallapokra osztanak (tumoronként 500-700 lapkát elemeznek). Az egyes markerek sűrűségét az egyes tumorrégiókban leginkább infiltrált három lap átlagos sűrűségének felhasználásával számítjuk ki. Minden egyes marker esetében elvégzik a nagy sűrűségű (Hi) vagy alacsony (Lo) kategorizálást minden egyes érdeklődésre számot tartó tumorrégióban. Ezt a kategorizálást úgy végezzük, hogy a megfigyelt sűrűséget összehasonlítjuk az optimális határsűrűséggel (min p érték megközelítés), amelyet korábban meghatároztunk a DFS-re és az OS-re egy 250 CRC retrospektív vizsgálatában. Genetikai elemzések: A genetikai vizsgálatra aláírt beleegyező nyilatkozattal rendelkező betegek genetikai elemzésére szolgáló metszeteket tartalmazó csövek a Hôpital Européen Georges Pompidou Biológiai Osztályára kerülnek. Az egyes mintákban a tumorsejtek százalékos arányát patológus határozza meg (H&E értékelés alapján; kevesebb, mint 10%, 10-20%, 20-50%, legfeljebb 50% tumorsejtek), és elvégzi a DNS-kivonást. . A genetikai vizsgálat magában foglalja az MSI állapotát, a K-Ras és a BRAF mutáció jelenlétét