O Immunoscore como um marcador de prognóstico para pacientes com câncer colorretal (IMMUCOL)

O principal objetivo é avaliar o impacto do imunoscore na prática clínica. Para tanto, o parâmetro imunológico (CD3, CD8, CD45RO) dos cânceres colorretais (estágio I-IV) será avaliado prospectivamente por meio de um grande estudo multicêntrico. Serão incluídos 400 pacientes com CCR estágio I a IV (6 centros para inclusão; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). O número de doentes a incluir foi calculado com base num período de inclusão de 24 meses, um seguimento de 3 anos (está prevista uma recolha de dados durante o 4º e 5º ano com co-financiamento), uma expectativa taxa de eventos de 20%, valor prognóstico do parâmetro imunológico semelhante ao observado no estudo retrospectivo de 399 pacientes com CCR (*1) e poder do teste de 90%. Tanto na gestão inicial como no seguimento, serão registados todos os procedimentos terapêuticos (cirurgia, radioterapia, quimioterapia…). Serão coletados dados do exame clínico, exames radiológicos e testes biológicos que normalmente são realizados durante uma internação por câncer colorretal: Exame clínico completo e questionamento sobre a presença de antecedentes pessoais e familiares de CCR, adenomas e outros cânceres; Ultrassonografia abdominal, radiografia de tórax; Tomografia computadorizada (TC) e ressonância magnética (MRI) de acordo com a necessidade do clínico; Testes laboratoriais padrão e análise de sangue para antígeno carcinoembrionário (CEA); O estudo histopatológico do tumor contendo o estado das margens da excisão cirúrgica, o tipo histológico do câncer, o nível de invasão parietal, o número de linfonodos examinados e o número de linfonodos metastáticos, de acordo com a classificação TNM. Os pacientes serão acompanhados a cada 3 meses durante os primeiros 2 anos e a cada 6 meses no restante do período de acompanhamento, conforme recomendado. Cada paciente será acompanhado por até 5 anos. Dados clínicos, biológicos e radiológicos serão registrados em CRF específico. A verificação das inclusões e o monitoramento dos dados serão conduzidos pela Unidade de Pesquisa Clínica do HEGP (URC HEGP) e pelo investigador principal. Um plano de gerenciamento de dados será construído de acordo com o monitoramento. Um questionário também será enviado aos pacientes a cada seis meses durante cinco anos. Este questionário foi construído pelo Pr F Pagès e por psicólogos e psiquiatras para buscar informações sobre (i) a presença de um distúrbio imunológico (como alergia, autoimunidade, processo inflamatório) e (ii) o estado psicológico dos pacientes (ex. depressão). Após o monitoramento, todos os dados serão armazenados em sistema de dupla digitação em um banco de dados MS-Access elaborado pela URC-HEGP e no banco de dados TME.dB criado pela equipe do pesquisador principal. Os 2 bancos de dados serão mesclados e o banco de dados final será congelado para análise estatística. Preparo da amostra: O patologista de cada centro escolherá um bloco tumoral contendo o núcleo do tumor e a margem invasiva. Este bloco tumoral faz parte das amostras tumorais processadas rotineiramente pelo departamento de Patologia para diagnóstico. Serão confeccionados três cortes teciduais de 4 mícrons e depositados em lâmina de vidro para realização da imunohistoquímica. Quatro seções de tecido de 4 mícrons serão feitas e depositadas em tubos Eppendorf safe lock para realização das análises genéticas. Nomes de pacientes anônimos nas lâminas e tubos serão fornecidos usando um número de código e as iniciais do paciente. Se biópsias para fins de diagnóstico estiverem disponíveis (ou seja, aqueles realizados para os pacientes durante sua internação inicial (50% dos casos), serão feitas seções de tecido de cada biópsia. Todas as lâminas e tubos serão enviados por correio para a plataforma HEGP para análise do infiltrado imune e para o departamento de Biologia para as análises genéticas. O imunoscore será determinado usando as seguintes etapas: Imunocolorações para CD3, CD8, CD45RO no Benchmark XT automate; Digitalização das imunocolorações no scanner Hamamatsu: Quantificação das populações imunes em áreas tumorais específicas (o núcleo e a margem invasiva) com um módulo de análise de imagem dedicado baseado no reconhecimento de estruturas histológicas adaptadas ao câncer colorretal. Este módulo foi desenvolvido pelo nosso grupo em parceria com a empresa Definiens. Um procedimento semiautomático permite a quantificação de células coradas em cada região do tumor. Cada região é dividida em ladrilhos de 800 mícrons de lado (500 a 700 ladrilhos analisados ​​por tumor). A densidade de cada marcador é calculada usando a densidade média dos três ladrilhos mais infiltrados em cada região do tumor. Será realizada uma categorização em alta densidade (Hi) ou baixa (Lo) para cada marcador em cada região tumoral de interesse. Essa categorização é feita comparando a densidade observada com a densidade de corte ideal (abordagem do valor min p) que determinamos anteriormente para DFS e OS em um estudo retrospectivo de 250 CRC. Análises genéticas: Os tubos contendo os cortes para as análises genéticas dos pacientes com consentimento informado assinado para investigação genética serão transferidos para o Departamento de Biologia do Hôpital Européen Georges Pompidou. A % de células tumorais de cada espécime será determinada por um patologista (com base em uma avaliação H&E; menos de 10%, 10-20%, 20-50%, até 50% de células tumorais) e a extração de DNA será realizada . A investigação genética incluirá o estado MSI, a presença de uma mutação K-Ras e BRAF