L'Immunoscore come marcatore prognostico per i pazienti con cancro del colon-retto (IMMUCOL)

L'obiettivo principale è valutare l'impatto dell'immunoscore nella pratica clinica. A tal fine, il parametro immunitario (CD3, CD8, CD45RO) dei tumori del colon-retto (stadio I-IV) sarà valutato in modo prospettico attraverso un ampio studio multicentrico. Saranno inclusi 400 pazienti con stadio CRC da I a IV (6 centri per l'inclusione; Paris-HEGP, Dijon, Bobigny-Avicenne, Besancon, Poitiers, Rouen). Il numero di pazienti da includere è stato calcolato sulla base di un periodo di inclusione di 24 mesi, un follow-up di 3 anni (è prevista una raccolta dati al 4° e 5° anno con un cofinanziamento), una previsione tasso di eventi del 20%, un valore prognostico del parametro immunitario simile a quello osservato nello studio retrospettivo di 399 pazienti con CRC (*1) e una potenza del test del 90%. Sia durante la gestione iniziale che durante il follow-up, verranno registrate tutte le procedure terapeutiche (chirurgia, radioterapia, chemioterapia…). I dati saranno raccolti dall'esame clinico, dagli esami radiologici e dai test biologici che vengono solitamente eseguiti durante un ricovero per cancro del colon-retto: esame clinico completo e domande sulla presenza di storia personale e familiare di CRC, adenomi e altri tumori; Ecografia addominale, radiografia del torace; Tomografia computerizzata (TC) e risonanza magnetica (MRI) in base alle esigenze del medico; Test di laboratorio standard e analisi del sangue per l'antigene carcinoembrionale (CEA); Lo studio istopatologico del tumore contenente lo stato dei margini di escissione chirurgica, il tipo istologico di tumore, il livello di invasione parietale, il numero di linfonodi esaminati e il numero di linfonodi metastatici, secondo la classificazione TNM. I pazienti saranno seguiti ogni 3 mesi durante i primi 2 anni e ogni 6 mesi per il resto del periodo di follow-up, come raccomandato. Ogni paziente sarà seguito fino a 5 anni. I dati clinici, biologici e radiologici saranno registrati in una specifica CRF. La verifica delle inclusioni e il monitoraggio dei dati saranno condotti dall'Unità di ricerca clinica HEGP (URC HEGP) e dal ricercatore principale. Verrà costruito un piano per la gestione dei dati in linea con il monitoraggio. Un questionario sarà inoltre inviato ai pazienti ogni sei mesi per cinque anni. Questo questionario è stato costruito dal Pr F Pagès e da psicologi e psichiatri per cercare informazioni riguardanti (i) la presenza di un disturbo immunitario (come allergia, autoimmunità, processo infiammatorio) e (ii) lo stato psicologico dei pazienti (es. depressione). Dopo il monitoraggio, tutti i dati verranno archiviati utilizzando un sistema di doppia immissione dei dati in un database MS-Access progettato da URC-HEGP e nel database TME.dB creato dal team del ricercatore principale. I 2 database verranno uniti e il database finale verrà congelato per l'analisi statistica. Preparazione del campione: il patologo di ciascun centro sceglierà un blocco tumorale contenente il nucleo del tumore e il margine invasivo. Questo blocco tumorale fa parte dei campioni tumorali elaborati di routine dal dipartimento di Patologia per la diagnosi. tre sezioni di tessuto di 4 micron saranno realizzate e depositate su un vetrino per eseguire l'immunoistochimica. Verranno realizzate quattro sezioni di tessuto di 4 micron e depositate su provette Eppendorf Safe Lock per eseguire le analisi genetiche. I nomi anonimi dei pazienti sui vetrini e sulle provette verranno forniti utilizzando un numero di codice e le iniziali del paziente. Se sono disponibili biopsie per scopi diagnostici (ad es. quelli eseguiti per i pazienti durante il loro ricovero iniziale (50% dei casi), Verrà eseguita una sezione di tessuto per ogni biopsia. Tutti i vetrini e le provette verranno inviati per posta alla piattaforma HEGP per l'analisi dell'infiltrato immunitario e al dipartimento di Biologia per le analisi genetiche. L'immunoscore sarà determinato utilizzando le seguenti fasi: Immunocolorazione per CD3, CD8, CD45RO su Benchmark XT automatizzato; Scansione delle immunocolorazioni su scanner Hamamatsu: quantificazione delle popolazioni immunitarie in specifiche aree tumorali (core e margine invasivo) con un modulo di analisi delle immagini dedicato basato sul riconoscimento delle strutture istologiche adattate al cancro del colon-retto. Questo modulo è stato sviluppato dal nostro gruppo in collaborazione con la società Definiens. Una procedura semiautomatica consente la quantificazione delle cellule colorate in ciascuna regione tumorale. Ogni regione è suddivisa in tessere di 800 micron di lato (da 500 a 700 tessere analizzate per tumore). La densità di ciascun marker viene calcolata utilizzando la densità media delle tre tessere più infiltrate in ciascuna regione tumorale. Verrà eseguita una categorizzazione in alta densità (Hi) o bassa (Lo) per ciascun marcatore in ciascuna regione tumorale di interesse. Questa categorizzazione viene effettuata confrontando la densità osservata con la densità di cut-off ottimale (approccio del valore min p) che abbiamo precedentemente determinato per DFS e OS in uno studio retrospettivo di 250 CRC. Analisi genetiche: I tubi contenenti le sezioni per le analisi genetiche dei pazienti con consenso informato firmato per l'indagine genetica saranno trasferiti al Dipartimento di Biologia, Hôpital Européen Georges Pompidou. La % di cellule tumorali di ciascun campione sarà determinata da un patologo (sulla base di una valutazione H&E; meno del 10%, 10-20%, 20-50%, fino al 50% di cellule tumorali) e verrà eseguita l'estrazione del DNA . L'indagine genetica comprenderà lo stato MSI, la presenza di una mutazione K-Ras e BRAF