鼻病毒诱发哮喘发作的机制

我们，研究人员，假设在鼻病毒引起的哮喘急性加重中存在不同的基因谱。 我们进一步假设基因表达的这些变化涉及已知的哮喘表型介质以及以前与哮喘无关的其他分子。

本研究的主要目的是使用基因阵列分析来确定体内鼻病毒感染之前和期间正常和哮喘受试者的支气管上皮细胞和肺泡巨噬细胞中差异表达的基因。 次要目标是确定任何改变的表达是否与体内症状严重程度、病毒载量、肺功能或气道炎症有关。

我们计划招募 45 名受试者：15 名健康志愿者、15 名未接受吸入皮质类固醇治疗的哮喘患者和 15 名接受吸入皮质类固醇治疗的哮喘患者，他们将接受两次支气管镜检查，一次在感染鼻病毒之前进行，第二次在接种后 4 天进行。 将进行支气管刷洗、活检和支气管肺泡灌洗 (BAL)。 RNA 将用 TRIzol 试剂（Invitrogen，Carlsbad，CA）提取并通过 RNeasy 柱（Qiagen，Valencia，CA）纯化。 外显子 1.0ST 阵列芯片（Affymetrix，Santa Clara，CA）将用于分析基因表达的变化。 这些是最强大的基因组表达工具，每个阵列有 140 万个探针组和超过 550 万个特征。 发现显着上调的基因将通过定量 RT-PCR 确认。

使用一种收集未稀释的支气管上皮衬里液（支气管吸附）的新方法，将使用 MesoScale Discovery 多重阵列系统（MesoScale Discovery，Gaithersburg，MD）测量大量蛋白质，从而进一步确认基因阵列结果并提供体内哮喘患者蛋白质生成失调的证据。 基因表达和蛋白质水平将与体内病毒载量、症状评分、肺功能和气道炎症相关联。

这项研究代表了对体内鼻病毒感染期间支气管上皮基因表达变化的首次综合评估，因此有可能对哮喘中的宿主反应提供重要的见解，并确定潜在的新靶点以供进一步评估。