Механизмы обострений астмы, вызванной риновирусом

Мы, исследователи, предполагаем, что существуют различные генные профили при острых обострениях астмы, вызванных риновирусами. Мы также предполагаем, что эти изменения в экспрессии генов связаны как с известными медиаторами фенотипа астмы, так и с другими молекулами, ранее не связанными с астмой.

Основной целью этого исследования является использование анализа массива генов для определения дифференциально экспрессируемых генов в бронхиальных эпителиальных клетках и альвеолярных макрофагах у нормальных и страдающих астмой субъектов до и во время риновирусной инфекции in vivo. Вторичная цель состоит в том, чтобы определить, связаны ли какие-либо измененные экспрессии с тяжестью симптомов, вирусной нагрузкой, функцией легких или воспалением дыхательных путей in vivo.

Мы планируем набрать 45 субъектов: 15 здоровых добровольцев, 15 астматиков, ранее не получавших ингаляционную кортикостероидную терапию, и 15 астматиков, получающих ингаляционные кортикостероиды, которые пройдут две бронхоскопии, одну до заражения риновирусом и вторую через 4 дня после прививки. Будут выполнены чистки бронхов, биопсия и бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ). РНК будет экстрагирована реагентом TRIzol (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния) и очищена путем пропускания через колонки RNeasy (Qiagen, Валенсия, Калифорния). Чипы массива Exon 1.0ST (Affymetrix, Санта-Клара, Калифорния) будут использоваться для анализа изменений в экспрессии генов. Это самые мощные инструменты экспрессии генома, доступные с 1,4 миллионами наборов зондов и более чем 5,5 миллионами признаков на массив. Обнаружено, что гены со значительной активацией будут подтверждены количественной ОТ-ПЦР.

Используя новый метод сбора неразбавленной жидкости бронхиального эпителия (бронхосорбция), большое количество белков будет измерено с помощью мультиплексной системы массивов MesoScale Discovery (MesoScale Discovery, Gaithersburg, Md), что позволит дополнительно подтвердить результаты генного массива, а также обеспечить in vivo свидетельствует о нарушении регуляции продукции белка у астматиков. Экспрессия генов и уровни белка будут коррелировать с вирусной нагрузкой, оценкой симптомов, функцией легких и воспалением дыхательных путей in vivo.

Это исследование представляет собой первую всестороннюю оценку изменений в экспрессии генов бронхиального эпителия во время риновирусной инфекции in vivo и, следовательно, может дать существенное представление о реакции хозяина на астму и определить потенциальные новые мишени для дальнейшей оценки.