Meccanismi delle riacutizzazioni dell'asma indotte da Rhinovirus

Noi, i ricercatori, ipotizziamo che ci siano profili genici distinti nelle esacerbazioni acute dell'asma indotte da rhinovirus. Ipotizziamo inoltre che questi cambiamenti nell'espressione genica coinvolgano sia noti mediatori del fenotipo dell'asma sia altre molecole non precedentemente associate all'asma.

L'obiettivo principale di questo studio è utilizzare l'analisi dell'array genico per determinare i geni differenzialmente espressi nelle cellule epiteliali bronchiali e nei macrofagi alveolari di soggetti normali e asmatici prima e durante l'infezione da rinovirus in vivo. Un obiettivo secondario è determinare se eventuali espressioni alterate sono correlate alla gravità dei sintomi, alla carica virale, alla funzione polmonare o all'infiammazione delle vie aeree in vivo.

Abbiamo in programma di reclutare 45 soggetti: 15 volontari sani, 15 asmatici naïve alla terapia con corticosteroidi inalatori e 15 asmatici in terapia con corticosteroidi inalatori che verranno sottoposti a due broncoscopie, una prima dell'infezione da rhinovirus e la seconda 4 giorni dopo l'inoculazione. Verranno eseguiti brushing bronchiale, biopsie e lavaggio broncoalveolare (BAL). L'RNA sarà estratto con il reagente TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA) e purificato mediante passaggio attraverso colonne RNeasy (Qiagen, Valencia, CA). I chip dell'array Exon 1.0ST (Affymetrix, Santa Clara, CA) saranno usati per analizzare i cambiamenti nell'espressione genica. Questi sono gli strumenti di espressione del genoma più potenti disponibili con 1,4 milioni di set di sonde e oltre 5,5 milioni di caratteristiche per array. I geni trovati essere significativamente sovraregolati saranno confermati mediante RT-PCR quantitativa.

Utilizzando un nuovo metodo di raccolta del fluido di rivestimento epiteliale bronchiale non diluito (broncosorbimento), un gran numero di proteine ​​sarà misurato con un sistema di array multiplex MesoScale Discovery (MesoScale Discovery, Gaithersburg, Md) consentendo un'ulteriore conferma dei risultati dell'array genico oltre a fornire in vivo evidenza di produzione proteica disregolata negli asmatici. L'espressione genica ei livelli proteici saranno correlati con la carica virale, i punteggi dei sintomi, la funzione polmonare e l'infiammazione delle vie aeree in vivo.

Questo studio rappresenta la prima valutazione completa dei cambiamenti nell'espressione genica epiteliale bronchiale durante l'infezione da rinovirus in vivo e quindi ha il potenziale per fornire approfondimenti significativi sulla risposta dell'ospite nell'asma e identificare potenziali nuovi bersagli per un'ulteriore valutazione.