Mecanismos de Exacerbações de Asma Induzidas por Rinovírus

Nós, os investigadores, levantamos a hipótese de que existem perfis gênicos distintos nas exacerbações agudas da asma induzidas por rinovírus. Além disso, levantamos a hipótese de que essas alterações na expressão gênica envolvem tanto mediadores conhecidos do fenótipo da asma quanto outras moléculas não previamente associadas à asma.

O objetivo principal deste estudo é usar a análise de matriz de genes para determinar genes diferencialmente expressos em células epiteliais brônquicas e macrófagos alveolares de indivíduos normais e asmáticos antes e durante a infecção por rinovírus in vivo. Um objetivo secundário é determinar se quaisquer expressões alteradas estão relacionadas à gravidade dos sintomas, carga viral, função pulmonar ou inflamação das vias aéreas in vivo.

Planejamos recrutar 45 indivíduos: 15 voluntários saudáveis, 15 asmáticos virgens de terapia com corticosteroides inalatórios e 15 asmáticos em uso de corticosteroides inalatórios que serão submetidos a duas broncoscopias, uma antes da infecção pelo rinovírus e a segunda 4 dias após a inoculação. Escovações brônquicas, biópsias e lavagem broncoalveolar (LBA) serão realizadas. O RNA será extraído com reagente TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA) e purificado por passagem por colunas RNeasy (Qiagen, Valencia, CA). Chips de matriz Exon 1.0ST (Affymetrix, Santa Clara, CA) serão usados ​​para analisar mudanças na expressão gênica. Estas são as ferramentas de expressão genômica mais poderosas disponíveis com 1,4 milhão de conjuntos de sondas e mais de 5,5 milhões de recursos por matriz. Os genes considerados significativamente regulados positivamente serão confirmados por RT-PCR quantitativo.

Usando um novo método de coleta de fluido de revestimento epitelial brônquico não diluído (broncossorção), um grande número de proteínas será medido com um sistema de matriz multiplexada MesoScale Discovery (MesoScale Discovery, Gaithersburg, Md), permitindo confirmação adicional dos resultados da matriz de genes, bem como fornecendo in vivo evidências de produção de proteína desregulada em asmáticos. A expressão gênica e os níveis de proteína serão correlacionados com a carga viral, escores de sintomas, função pulmonar e inflamação das vias aéreas in vivo.

Este estudo representa a primeira avaliação abrangente das alterações na expressão do gene epitelial brônquico durante a infecção por rinovírus in vivo e, portanto, tem o potencial de fornecer informações significativas sobre a resposta do hospedeiro na asma e identificar novos alvos potenciais para avaliação posterior.