Mecanismos de las exacerbaciones del asma inducidas por rinovirus

Nosotros, los investigadores, planteamos la hipótesis de que existen distintos perfiles genéticos en las exacerbaciones agudas del asma inducidas por rinovirus. Además, planteamos la hipótesis de que estos cambios en la expresión génica involucran tanto a mediadores conocidos del fenotipo de asma como a otras moléculas no asociadas previamente con el asma.

El objetivo principal de este estudio es utilizar el análisis de matriz de genes para determinar genes expresados ​​diferencialmente en células epiteliales bronquiales y macrófagos alveolares de sujetos normales y asmáticos antes y durante la infección por rinovirus in vivo. Un objetivo secundario es determinar si alguna expresión alterada está relacionada con la gravedad de los síntomas, la carga viral, la función pulmonar o la inflamación de las vías respiratorias in vivo.

Planeamos reclutar 45 sujetos: 15 voluntarios sanos, 15 asmáticos que no han recibido tratamiento con corticosteroides inhalados y 15 asmáticos con corticosteroides inhalados que se someterán a dos broncoscopias, una antes de la infección con rinovirus y la segunda 4 días después de la inoculación. Se realizarán cepillados bronquiales, biopsias y lavado broncoalveolar (BAL). El ARN se extraerá con reactivo TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA) y se purificará mediante el paso a través de columnas RNeasy (Qiagen, Valencia, CA). Se utilizarán chips de matriz Exon 1.0ST (Affymetrix, Santa Clara, CA) para analizar los cambios en la expresión génica. Estas son las herramientas de expresión genómica más potentes disponibles con 1,4 millones de conjuntos de sondas y más de 5,5 millones de funciones por matriz. Los genes que se encuentren significativamente regulados al alza se confirmarán mediante RT-PCR cuantitativa.

Con un método novedoso de recolección de líquido de revestimiento epitelial bronquial sin diluir (broncosorción), se medirán grandes cantidades de proteínas con un sistema de matriz multiplexado MesoScale Discovery (MesoScale Discovery, Gaithersburg, Md) lo que permitirá una mayor confirmación de los resultados de la matriz de genes, además de proporcionar resultados in vivo. evidencia de producción de proteína desregulada en asmáticos. La expresión génica y los niveles de proteínas se correlacionarán con la carga viral, las puntuaciones de los síntomas, la función pulmonar y la inflamación de las vías respiratorias in vivo.

Este estudio representa la primera evaluación exhaustiva de los cambios en la expresión génica del epitelio bronquial durante la infección por rinovirus in vivo y, por lo tanto, tiene el potencial de proporcionar información importante sobre la respuesta del huésped en el asma e identificar nuevos objetivos potenciales para una evaluación adicional.