γ-辐照卡介苗培养先天免疫力

1. 介绍和基本原理

   卡介苗减毒活疫苗 (BCG) 可预防结核分枝杆菌的肺外感染和麻风病 [1, 2]。 已经表明，接种 BCG 疫苗也会产生非特异性保护作用：早期接种 BCG 疫苗可能会降低儿童死亡率，这主要是因为新生儿败血症、呼吸道感染和发烧减少。 [3-5] 此外，BCG 还被用于膀胱癌患者，以诱导免疫系统的改善反应，从而防止肿瘤进展和死亡。 [6] 最近，研究表明，BCG 疫苗接种可以诱导人单核细胞的表观遗传变化，从而在体外用非相关病原体再刺激时导致更高的促炎细胞因子反应。 [7] 观察到的影响被认为是由于人类先天免疫系统的调节，在一个称为“训练免疫”的过程中。 在受到病原体刺激后，先天免疫系统开始准备就绪，能够更快、更有效地对次级（和非相关）刺激做出反应。 [7, 8]

   考虑到 BCG 对先天宿主防御的这些有益影响，有理由假设在 T 细胞和 B 细胞免疫缺陷的宿主中产生“训练有素的免疫状态”是有帮助的，因为它们更容易受到感染。 然而，由于他们的免疫受损状态，这些患者不能接种减毒活疫苗（例如 BCG）。 [9] 用 γ 辐照的 BCG 接种疫苗是可能的，但不知道 γ 辐照的疫苗是否对先天宿主防御具有相同的保护性非特异性作用。 在最近的体外实验中，研究人员证明经 y 辐照的 BCG 可以在体外训练单核细胞（未发表）。 因此，本研究的目的是确定经 γ 辐照的 BCG 是否能够在体内训练健康志愿者的人体先天免疫系统，就像之前使用减毒活 BCG 疫苗所显示的那样 [7]。

2. 目标

   主要目的：通过比较接种 γ 辐照 BCG 之前、2 周和 3 个月后与病原体体外再刺激时细胞因子的产生，确定 γ 辐照 BCG 是否可以在体内训练先天免疫系统。

3. 学习规划

   将进行为期三个月的探索性干预研究。 将招募 15 名健康志愿者接种 γ 辐照卡介苗。 知情同意后，将在疫苗接种前和疫苗接种后 2 周和 3 个月抽取 40 毫升血液。

4. 研究人群 4.1 人群健康志愿者，18-55 岁。 4.2 纳入标准受试者必须是年龄在18-55岁之间的健康成年人。 4.3 排除标准 排除来自结核病流行国家、接触过结核病患者或已接种卡介苗的受试者。 如果受试者患有任何疾病，包括并发感染，则受试者将被排除在研究之外。 受试者不得使用除口服抗避孕药外的任何药物。

   4.4 样本量计算 这是一项探索性试验，无法计算样本量。

5. 受试者的治疗 5.1 研究产品/治疗 受试者将接种 γ-辐照的 BCG 疫苗（BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]），该疫苗购自 Radboud Apotheek B.V.

   BCG 疫苗的 γ-辐照将由荷兰埃德的 Synergy Health Ede B.V.（在荷兰经济事务部注册）进行。 BCG 疫苗在原包装中在 JS6500 手提箱辐照器中以平均剂量 32.2kGy 进行辐照。 该剂量基于文献中接受的最小剂量 25kGy，该剂量已被证明足以杀死结核分枝杆菌 [10, 11]。 辐照后，疫苗将以原包装原封不动地退回。 在辐照过程中，包括一个剂量计，因此每个辐照批次都会附有一份证书，其中包含所用的确切辐照剂量。

   5.2 联合干预的使用 受试者不得使用任何药物，口服抗孕药除外。

6. 研究产品 6.1 研究产品的名称和描述 γ-辐照 BCG 疫苗（BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]）丹麦株 1331。

   6.2 非临床研究结果总结 通过在特殊的结核病培养基中培养经γ-辐照的卡介苗，验证了卡介苗疫苗的γ-辐照杀灭效果。 六周后未检测到生长。

   6.3 临床研究结果总结 一项具有可比研究设置的相关研究已经完成，其中 20 名健康志愿者接种了减毒活 BCG 疫苗。 [7] 研究人员的研究将使用相同的研究方案。 唯一的区别是，将使用 γ 辐照的 BCG 疫苗，而不是活的减毒 BCG 疫苗。

   6.4 已知和潜在风险和收益的总结 志愿者没有明确的收益。 潜在风险非常小，因为 BCG 被认为是一种安全的疫苗。 BCG 疫苗接种会导致注射部位疼痛和疤痕，如发烧和头痛，以及非常偶发的副作用，如晕厥、抽搐和过敏反应。 局部血肿形成可能发生在采血部位。

   6.5 给药途径和剂量的说明与论证 上臂缓慢给药，约10秒，皮内注射悬浮疫苗0.1ml，其中牛分枝杆菌0.075mg。

7. 方法 7.1 研究参数/终点 在接种疫苗前和接种 γ-辐照的 BCG 疫苗后的两个不同时间点（2 周和 3 个月）将抽取血液，通过 Ficoll-Paque 密度离心从中分离 PBMC。 单核细胞将用不同的病原体（M. 结核病 (1µg/ml)、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌（均为 1 x 10^6 微生物/ml）和大肠杆菌 LPS (10ng/ml)。 将在 24 小时（TNFa、IL 1b 和 IL-6）、48 小时（IFN、IL-10）和 7 天（IL-17、IL-22）刺激后评估细胞因子的产生，并与接种疫苗前的细胞因子产生进行比较。

7.2 研究程序 受试者将接种经γ-辐照的BCG疫苗。 接种前和接种后两次，将抽取 40 毫升血液。

7.3 个别受试者的退出 如果受试者愿意，他们可以随时以任何理由离开研究而不会产生任何后果。

7.4 退出后个别受试者的更换 每个退出的受试者将被替换，以便总共15名受试者完成随访。