γ-besugárzott BCG a veleszületett immunitás kialakításához

1. BEVEZETÉS ÉS INDOKOLÁS

   Az élő attenuált Bacillus Calmette-Guerin (BCG) vakcina védelmet nyújt a Mycobacterium tuberculosis okozta extrapulmonális fertőzés és a lepra ellen [1, 2]. Kimutatták, hogy a BCG-vel végzett oltás nem specifikus védőhatásokkal is jár: a BCG-oltás korai beadása a gyermekhalandóság csökkenéséhez vezethet, főként az újszülöttkori szepszis, légúti fertőzések és láz csökkenése következtében. [3-5] Ezenkívül a BCG-t húgyhólyagrákban szenvedő betegeknél is alkalmazták az immunrendszer jobb reakciójának kiváltására, ami megakadályozza a daganat progresszióját és az elhalást. [6] A közelmúltban kimutatták, hogy a BCG vakcináció epigenetikai változásokat indukálhat a humán monocitákban, ami magasabb pro-inflammatorikus citokinválaszt eredményez, ha in vitro nem rokon kórokozókkal újrastimulálják. [7] A megfigyelt hatások a feltételezések szerint az emberi veleszületett immunrendszer modulációjának tudhatók be, az úgynevezett „edzett immunitásnak” nevezett folyamat során. A kórokozóval történő stimuláció hatására a veleszületett immunrendszer feltámad, és gyorsabban és hatékonyabban tud reagálni egy másodlagos (és nem kapcsolódó) ingerre. [7, 8]

   Figyelembe véve a BCG-nek a veleszületett gazdaszervezet védelmére gyakorolt ​​jótékony hatásait, ésszerű feltételezni, hogy hasznos lenne „edzett immunitási státuszt” létrehozni a T- és B-sejtes immunitásban hibás gazdákban, mivel ők érzékenyebbek a fertőzésekre. Immunkompromittált állapotuk miatt azonban ezek a betegek nem olthatók élő attenuált vakcinákkal (pl. BCG). [9] Az y-besugárzott BCG-vel történő vakcinázás lehetséges lenne, de nem ismert, hogy a γ-besugárzott vakcinának ugyanolyan védő, nem specifikus hatásai vannak-e a veleszületett gazdaszervezet védelmére. A közelmúltban végzett in vitro kísérletekben a kutatók kimutatták, hogy az y-besugárzott BCG képes a monociták képzésére in vitro (nem publikált). Ezért ennek a vizsgálatnak a célja annak meghatározása, hogy a γ-besugárzott BCG képes-e edzeni az egészséges önkéntesek emberi veleszületett immunrendszerét in vivo, ahogy azt az élő, legyengített BCG vakcina esetében korábban bemutattuk [7].

2. CÉLKITŰZÉSEK

   Elsődleges cél: Annak meghatározása, hogy a γ-besugárzott BCG képes-e edzeni a veleszületett immunrendszert in vivo, összehasonlítva a citokintermelést ex vivo kórokozókkal végzett újrastimuláció után az y-besugárzott BCG-vel végzett vakcinázás előtt, 2 héttel és 3 hónappal azután.

3. DIZÁJNT TANULNI

   Három hónapos feltáró intervenciós tanulmányt fognak végezni. 15 egészséges önkéntest vesznek fel, hogy megkapják a γ-besugárzott BCG oltást. Tájékozott beleegyezés után 40 ml vért vesznek az oltás előtt és 2 héttel és 3 hónappal az oltás után.

4. VIZSGÁLATI LÉPESSÉG 4.1 Népesség Egészséges önkéntesek, 18-55 évesek. 4.2 Bevételi kritériumok Az alanyoknak egészséges felnőtteknek kell lenniük, 18 és 55 év közöttiek. 4.3 Kizárási kritériumok Az alanyok kizárásra kerülnek, ha a tuberkulózis endémiás országaiból származnak, ha kapcsolatba kerültek tuberkulózisos betegekkel, vagy ha már megkapták a BCG oltást. Az alanyokat kizárják a vizsgálatból, ha bármilyen betegségben szenvednek, beleértve az interkurrens fertőzéseket is. Az alanyok nem használhatnak semmilyen gyógyszert, kivéve az orális fogamzásgátló szereket.

   4.4 Mintaméret számítás Ez egy feltáró jellegű próba, amelyre a mintanagyság kiszámítása nem lehetséges.

5. AZ ÁLLATOK KEZELÉSE 5.1 ​​Vizsgálati termék/kezelés Az alanyokat y-besugárzott BCG vakcinával (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]) kell beoltani, amelyet a Radboud Apotheek B.V.-től vásároltak.

   A BCG vakcina γ-besugárzását a Synergy Health Ede B.V., Ede, Hollandia végzi (a holland gazdasági minisztérium regisztrálta). A BCG vakcinát az eredeti csomagolásban sugározták be, átlagosan 32,2 kGy dózissal egy JS6500 Tote Box besugárzóban. Ez a dózis az irodalomban elfogadott 25 kGy minimális dózison alapul, amelyről bebizonyosodott, hogy elegendő az M. tuberculosis elpusztításához [10, 11]. A besugárzást követően a vakcinát bontatlanul, az eredeti csomagolásban küldjük vissza. A besugárzás során egy dózismérőt is mellékelünk, így minden besugárzott tételhez igazolás érkezik a pontos besugárzási dózisról.

   5.2 Együttes beavatkozás alkalmazása Az alanyok semmilyen gyógyszert nem használhatnak, kivéve az orális fogamzásgátlást.

6. VIZSGÁLATI TERMÉK 6.1 Vizsgálati termék(ek) neve és leírása y-Besugárzott BCG vakcina (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]) dán 1331-es törzs.

   6.2 A nem-klinikai vizsgálatok eredményeinek összefoglalása A BCG vakcina γ-besugárzással történő elpusztításának hatékonyságát az y-besugárzott BCG speciális tuberkulózis táptalajban való tenyésztésével igazoltuk. Hat hét után nem észleltek növekedést.

   6.3 A klinikai vizsgálatok eredményeinek összefoglalása Egy kapcsolódó vizsgálat hasonló vizsgálati összeállítással, amelyben 20 egészséges önkéntest oltottak be élő attenuált BCG vakcinával, már elkészült. [7] A kutatók vizsgálata ugyanazt a vizsgálati protokollt fogja használni. Az egyetlen különbség az, hogy az élő attenuált BCG vakcina helyett egy y-besugárzott BCG vakcina kerül alkalmazásra.

   6.4 Az ismert és lehetséges kockázatok és előnyök összefoglalása Nincsenek egyértelmű előnyök az önkéntesek számára. A lehetséges kockázatok nagyon kicsik, mivel a BCG biztonságos vakcinának tekinthető. A BCG oltás fájdalmat és hegesedést okozhat az injekció beadásának helyén, csakúgy, mint lázat és fejfájást, valamint nagyon szórványosan fellépő mellékhatásokat, mint például ájulás, görcsök és allergiás reakció. A vérvétel helyén lokális hematóma képződhet.

   6.5 Az alkalmazási mód és az adagolás leírása és indoklása Lassan, körülbelül 10 másodperc alatt adjon be a felkarba 0,1 ml szuszpendált vakcinát, amely 0,075 mg Mycobacterium bovist jelent.

7. MÓDSZEREK 7.1 Vizsgálati paraméterek/végpontok Az oltás előtt és a γ-besugárzott BCG-vel végzett vakcináció után két különböző időpontban (2 hét és 3 hónap) vért vesznek, amelyből a PBMC-ket sűrűségcentrifugálással Ficoll-Paque-on izolálják. A monociták ex vivo újrastimulálódnak különböző kórokozókkal (M. tuberculosis (1 µg/ml), S. aureus, C. albicans (mindkettő 1 x 10^6 mikroorganizmus/ml) és E. coli LPS (10 ng/ml). A citokintermelést 24 órás (TNFa, IL 1b és IL-6), 48 órás (IFN, IL-10) és 7 napos (IL-17, IL-22) stimuláció után értékelik, és összehasonlítják a vakcinázás előtti citokintermeléssel.

7.2 Vizsgálati eljárások Az alanyokat y-besugárzott BCG vakcinával kell beoltani. Az oltás előtt és kétszer 40 ml vért vesznek.

7.3 Egyedi tantárgyak visszavonása A vizsgálati alanyok bármikor, bármilyen okból kiléphetnek a tanulmányból, ha ezt kívánják következmények nélkül.

7.4 Egyedi tantárgyak pótlása visszavonás után Minden visszavont tantárgy pótlásra kerül, így összesen 15 tantárgy teljesíti az utánkövetést.