BCG γ-irradié pour former l'immunité innée

1. INTRODUCTION ET JUSTIFICATION

   Le vaccin vivant atténué Bacillus Calmette-Guérin (BCG) protège contre l'infection extrapulmonaire à Mycobacterium tuberculosis et contre la lèpre [1, 2]. Il a été démontré que la vaccination par le BCG entraîne également des effets protecteurs non spécifiques : l'administration précoce de la vaccination par le BCG pourrait entraîner une réduction de la mortalité infantile, principalement en raison d'une réduction de la septicémie néonatale, des infections respiratoires et de la fièvre. [3-5] En outre, le BCG a également été utilisé chez des patients atteints d'un cancer de la vessie, pour induire une réaction améliorée du système immunitaire, qui empêche la progression tumorale et la mort. [6] Récemment, il a été montré que la vaccination par le BCG peut induire des changements épigénétiques dans les monocytes humains, qui entraînent une réponse plus élevée des cytokines pro-inflammatoires lors de la restimulation avec des agents pathogènes non apparentés in vitro. [7] Il est proposé que les effets observés soient dus à la modulation du système immunitaire inné humain, dans un processus appelé « immunité entraînée ». Lors de la stimulation avec un agent pathogène, le système immunitaire inné devient amorcé et est capable de réagir plus rapidement et plus efficacement à un stimulus secondaire (et non lié). [7, 8]

   Compte tenu de ces effets bénéfiques du BCG sur la défense innée de l'hôte, il est raisonnable de supposer qu'il serait utile de générer un "statut d'immunité entraîné" chez les hôtes déficients en immunité des lymphocytes T et B, car ils sont plus vulnérables aux infections. Cependant, en raison de leur statut immunodéprimé, ces patients ne peuvent pas être vaccinés avec des vaccins vivants atténués (par ex. BCG). [9] La vaccination avec le BCG irradié y serait possible, mais on ne sait pas si le vaccin irradié γ a les mêmes effets protecteurs non spécifiques sur la défense innée de l'hôte. Dans de récentes expériences in vitro, les chercheurs ont démontré que le BCG irradié à l'y peut former des monocytes in vitro (non publié). Par conséquent, le but de cette étude est de déterminer si le BCG irradié aux rayons γ est capable d'entraîner le système immunitaire inné humain de volontaires sains in vivo, comme indiqué précédemment avec le vaccin BCG vivant atténué [7].

2. OBJECTIFS

   Objectif principal : Déterminer si le BCG irradié aux gamma peut entraîner le système immunitaire inné in vivo, en comparant la production de cytokines lors de la restimulation ex vivo avec des agents pathogènes avant, 2 semaines et 3 mois après la vaccination avec le BCG irradié aux y.

3. ÉTUDIER LE DESIGN

   Une étude d'intervention exploratoire d'une durée de trois mois sera réalisée. 15 volontaires sains seront recrutés pour recevoir une vaccination avec le BCG γ-irradié. Après consentement éclairé, 40 ml de sang seront prélevés avant la vaccination et à 2 semaines et 3 mois après la vaccination.

4. POPULATION DE L'ETUDE 4.1 Population Volontaires sains, 18 - 55 ans. 4.2 Critères d'inclusion Les sujets doivent être des adultes en bonne santé, âgés de 18 à 55 ans. 4.3 Critères d'exclusion Les sujets sont exclus lorsqu'ils sont originaires de pays d'endémie tuberculeuse, s'ils ont été en contact avec des patients tuberculeux ou s'ils ont déjà été vaccinés par le BCG. Les sujets sont exclus de l'étude s'ils souffrent de toute maladie, y compris les infections intercurrentes. Les sujets ne sont pas autorisés à utiliser des médicaments à l'exception des agents anticonceptionnels oraux.

   4.4 Calcul de la taille de l'échantillon Il s'agit d'un essai exploratoire, pour lequel le calcul de la taille de l'échantillon n'est pas possible.

5. TRAITEMENT DES SUJETS 5.1 Produit/traitement expérimental Les sujets seront vaccinés avec un vaccin BCG irradié à l'y (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]), acheté auprès de Radboud Apotheek B.V.

   L'irradiation gamma du vaccin BCG sera effectuée par Synergy Health Ede B.V., Ede, Pays-Bas (enregistré par le ministère néerlandais des Affaires économiques). Le vaccin BCG a été irradié dans son emballage d'origine avec une dose moyenne de 32,2 kGy dans un irradiateur JS6500 Tote Box. Cette dose est basée sur une dose minimale acceptée dans la littérature de 25 kGy, qui s'est avérée suffisante pour tuer M. tuberculosis [10, 11] . Après irradiation, le vaccin sera retourné non ouvert dans son emballage d'origine. Pendant l'irradiation, un dosimètre est inclus, de sorte que chaque lot irradié sera accompagné d'un certificat indiquant la dose d'irradiation exacte utilisée.

   5.2 Utilisation de la co-intervention Les sujets ne sont pas autorisés à utiliser des médicaments, à l'exception des anticonceptionnels oraux.

6. PRODUIT DE RECHERCHE 6.1 Nom et description du ou des produits de recherche Vaccin BCG irradié (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]) souche danoise 1331.

   6.2 Résumé des résultats des études non cliniques L'efficacité de la destruction par irradiation gamma du vaccin BCG a été vérifiée en cultivant le BCG irradié à l'y dans un milieu de culture spécial tuberculose. Aucune croissance n'a été détectée après six semaines.

   6.3 Résumé des résultats des études cliniques Une étude connexe avec une configuration d'étude comparable, dans laquelle 20 volontaires sains ont été vaccinés avec le vaccin BCG vivant atténué a déjà été réalisée. [7] L'étude des investigateurs utilisera le même protocole d'étude. La seule différence est qu'au lieu du vaccin BCG vivant atténué, un vaccin BCG irradié à l'y sera utilisé.

   6.4 Résumé des risques et avantages connus et potentiels Il n'y a pas d'avantages clairs pour les volontaires. Les risques potentiels sont très faibles, car le BCG est considéré comme un vaccin sûr. La vaccination par le BCG peut provoquer des douleurs et des cicatrices au site d'injection, ainsi que de la fièvre et des maux de tête, et des effets secondaires très sporadiques tels que syncope, convulsions et réaction allergique. La formation d'un hématome local peut se produire sur le site de la prise de sang.

   6.5 Description et justification de la voie d'administration et de la posologie Administrer au bras lentement, en 10 secondes environ, par voie intracutanée 0,1 ml du vaccin en suspension, ce qui représente 0,075 mg de Mycobacterium bovis.

7. MÉTHODES 7.1 Paramètres de l'étude/critères Avant la vaccination et à deux moments différents après la vaccination avec le BCG irradié aux rayons gamma (2 semaines et 3 mois), du sang sera prélevé, à partir duquel les PBMC seront isolés par centrifugation de densité sur Ficoll-Paque. Les monocytes seront restimulés ex-vivo avec différents pathogènes (M. tuberculosis (1µg/ml), S. aureus, C. albicans (tous deux 1 x 10^6 micro-organismes/ml) et E. coli LPS (10ng/ml). La production de cytokines sera évaluée après 24h (TNFa, IL 1b et IL-6), 48h (IFN, IL-10) et 7 jours (IL-17, IL-22) de stimulation, et comparée à la production de cytokines avant vaccination.

7.2 Procédures de l'étude Les sujets seront vaccinés avec le vaccin BCG irradié à l'y. Avant et deux fois après la vaccination, 40 ml de sang seront prélevés.

7.3 Retrait de sujets individuels Les sujets peuvent quitter l'étude à tout moment pour n'importe quelle raison s'ils le souhaitent sans aucune conséquence.

7.4 Remplacement des sujets individuels après retrait Chaque sujet retiré sera remplacé, afin qu'au total 15 sujets complètent le suivi.