BCG irradiado com γ para treinar a imunidade inata

1. INTRODUÇÃO E FUNDAMENTAÇÃO

   A vacina viva atenuada Bacillus Calmette-Guerin (BCG) protege contra a infecção extrapulmonar com Mycobacterium tuberculosis e contra a lepra [1, 2]. Foi demonstrado que a vacinação com BCG também leva a efeitos protetores inespecíficos: a administração precoce da vacinação BCG pode levar à redução da mortalidade infantil, principalmente como resultado da redução da sepse neonatal, infecção respiratória e febre. [3-5] Além disso, o BCG também tem sido usado em pacientes com câncer de bexiga, para induzir uma reação melhorada do sistema imunológico, o que impede a progressão e morte do tumor. [6] Recentemente, foi demonstrado que a vacinação com BCG pode induzir alterações epigenéticas em monócitos humanos, que resultam em maior resposta de citocinas pró-inflamatórias após reestimulação com patógenos não relacionados in vitro. [7] Supõe-se que os efeitos observados sejam devidos à modulação do sistema imunológico inato humano, em um processo chamado 'imunidade treinada'. Após a estimulação com um patógeno, o sistema imune inato torna-se preparado e é capaz de reagir mais rápido e eficientemente a um estímulo secundário (e não relacionado). [7, 8]

   Considerando esses efeitos benéficos do BCG na defesa inata do hospedeiro, é razoável supor que seria útil gerar um 'estado de imunidade treinada' em hospedeiros defeituosos na imunidade de células T e B, pois são mais vulneráveis ​​a infecções. No entanto, devido ao seu estado imunitário comprometido, estes doentes não podem ser vacinados com vacinas vivas atenuadas (p. BCG). [9] A vacinação com BCG irradiada com y seria possível, mas não se sabe se a vacina irradiada com y tem os mesmos efeitos inespecíficos protetores na defesa inata do hospedeiro. Em experimentos in vitro recentes, os pesquisadores demonstraram que o BCG irradiado com y pode treinar monócitos in vitro (não publicado). Portanto, o objetivo deste estudo é determinar se o BCG γ irradiado é capaz de treinar o sistema imunológico inato humano de voluntários saudáveis ​​in vivo, assim como mostrado anteriormente com a vacina viva atenuada BCG [7].

2. OBJETIVOS

   Objetivo Primário: Determinar se o BCG irradiado com y pode treinar o sistema imune inato in vivo, comparando a produção de citocinas na reestimulação ex-vivo com patógenos antes, 2 semanas e 3 meses após a vacinação com BCG irradiado com y.

3. DESIGN DE ESTUDO

   Será realizado um estudo exploratório de intervenção com duração de três meses. 15 Voluntários saudáveis ​​serão recrutados para receber uma vacinação com BCG irradiada com γ. Após consentimento informado, 40ml de sangue serão coletados antes da vacinação e 2 semanas e 3 meses após a vacinação.

4. POPULAÇÃO DO ESTUDO 4.1 População Voluntários saudáveis, 18 - 55 anos de idade. 4.2 Critérios de inclusão Os sujeitos devem ser adultos saudáveis, com idade entre 18 e 55 anos. 4.3 Critérios de exclusão São excluídos os indivíduos provenientes de países endêmicos para tuberculose, que tenham tido contato com pacientes com tuberculose ou que já tenham sido vacinados com BCG. Os sujeitos são excluídos do estudo caso sofram de alguma doença, incluindo infecções intercorrentes. Os indivíduos não estão autorizados a usar qualquer medicamento, exceto agentes anticoncepcionais orais.

   4.4 Cálculo do tamanho da amostra Este é um estudo exploratório, para o qual o cálculo do tamanho da amostra não é possível.

5. TRATAMENTO DOS SUJEITOS 5.1 Produto/tratamento em investigação Os indivíduos serão vacinados com uma vacina BCG com radiação y (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]), que é adquirida da Radboud Apotheek B.V.

   A irradiação γ da vacina BCG será realizada pela Synergy Health Ede B.V., Ede, Holanda (registrada pelo Ministério Holandês de Assuntos Econômicos). A vacina BCG foi irradiada na embalagem original com uma dose média de 32,2kGy em um JS6500 Tote Box Irradiator. Esta dose é baseada em uma dose mínima aceita na literatura de 25kGy, que provou ser suficiente para matar o M. tuberculosis [10, 11] . Após a irradiação, a vacina será devolvida fechada na embalagem original. Durante a irradiação é incluso um dosímetro, assim cada lote irradiado virá acompanhado de um certificado com a exata dose de irradiação utilizada.

   5.2 Uso de co-intervenção Os sujeitos não estão autorizados a usar qualquer medicamento, exceto anticoncepcional oral.

6. PRODUTO EM INVESTIGAÇÃO 6.1 Nome e descrição do(s) produto(s) em investigação Vacina BCG y-irradiada (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]) Cepa dinamarquesa 1331.

   6.2 Resumo dos achados de estudos não clínicos A eficácia da morte por irradiação γ da vacina BCG foi verificada pela cultura do BCG irradiado com y em meio de cultura especial para tuberculose. Nenhum crescimento foi detectado após seis semanas.

   6.3 Resumo dos resultados dos estudos clínicos Um estudo relacionado com uma configuração de estudo comparável, no qual 20 voluntários saudáveis ​​foram vacinados com a vacina BCG viva atenuada já foi realizado. [7] O estudo dos investigadores usará o mesmo protocolo de estudo. A única diferença é que, em vez da vacina BCG viva atenuada, será usada uma vacina BCG com radiação y.

   6.4 Resumo dos riscos e benefícios conhecidos e potenciais Não há benefícios claros para os voluntários. Os riscos potenciais são muito pequenos, pois o BCG é considerado uma vacina segura. A vacinação com BCG pode causar dor e cicatrizes no local da injeção, assim como febre e dor de cabeça, e efeitos colaterais muito esporádicos, como síncope, convulsões e reação alérgica. A formação de hematoma local pode ocorrer no local da coleta de sangue.

   6.5 Descrição e justificativa da via de administração e dosagem Administrar na parte superior do braço lentamente, em cerca de 10 segundos, por via intracutânea 0,1ml da vacina suspensa, que corresponde a 0,075mg de Mycobacterium bovis.

7. MÉTODOS 7.1 Parâmetros/pontos finais do estudo Antes da vacinação e em dois momentos diferentes após a vacinação com BCG irradiado com γ (2 semanas e 3 meses) será coletado sangue, do qual PBMCs serão isoladas por centrifugação de densidade sobre Ficoll-Paque. Os monócitos serão reestimulados ex-vivo com diferentes patógenos (M. tuberculosis (1 µg/ml), S. aureus, C. albicans (ambos 1 x 10^6 microrganismos/ml) e E. coli LPS (10 ng/ml). A produção de citocinas será avaliada após 24h (TNFa, IL 1b e IL-6), 48h (IFN, IL-10) e 7 dias (IL-17, IL-22) estimulação, e comparada com a produção de citocinas antes da vacinação.

7.2 Procedimentos do estudo Os indivíduos serão vacinados com vacina BCG com radiação y. Antes e duas vezes após a vacinação, serão colhidos 40ml de sangue.

7.3 Retirada de sujeitos individuais Os sujeitos podem deixar o estudo a qualquer momento por qualquer motivo, se assim o desejarem sem quaisquer consequências.

7.4 Substituição de sujeitos individuais após a retirada Cada sujeito retirado será substituído, de modo que no total 15 sujeitos completarão o acompanhamento.