γ-ozářená BCG k trénování přirozené imunity

1. ÚVOD A ODŮVODNĚNÍ

   Živá atenuovaná vakcína Bacillus Calmette-Guerin (BCG) chrání před mimoplicní infekcí Mycobacterium tuberculosis a před leprou [1, 2]. Bylo prokázáno, že očkování BCG vede i k nespecifickým ochranným účinkům: včasné podání BCG vakcinace by mohlo vést ke snížení dětské úmrtnosti, zejména v důsledku snížení novorozenecké sepse, respiračních infekcí a horečky. [3-5] Kromě toho se BCG také používá u pacientů s rakovinou močového měchýře k navození zlepšené reakce imunitního systému, což zabraňuje progresi nádoru a smrti. [6] Nedávno se ukázalo, že BCG vakcinace může vyvolat epigenetické změny v lidských monocytech, které vedou k vyšší prozánětlivé cytokinové odpovědi po restimulaci nepříbuznými patogeny in vitro. [7] Předpokládá se, že pozorované účinky jsou způsobeny modulací lidského vrozeného imunitního systému v procesu zvaném „trénovaná imunita“. Po stimulaci patogenem se vrozený imunitní systém aktivuje a je schopen rychleji a efektivněji reagovat na sekundární (a nesouvisející) podnět. [7, 8]

   Vzhledem k těmto příznivým účinkům BCG na vrozenou obranu hostitele je rozumné předpokládat, že by bylo užitečné vytvořit „stav trénované imunity“ u hostitelů s defektní imunitou T- a B-buněk, protože jsou náchylnější k infekcím. Avšak vzhledem k jejich imunitnímu stavu nemohou být tito pacienti očkováni živými atenuovanými vakcínami (např. BCG). [9] Očkování BCG ozářeným y by bylo možné, ale není známo, zda vakcína ozářená γ má stejné ochranné nespecifické účinky na vrozenou obranu hostitele. V nedávných experimentech in vitro výzkumníci prokázali, že y-ozářený BCG může trénovat monocyty in vitro (nepublikováno). Cílem této studie je proto zjistit, zda je γ-ozářený BCG schopen trénovat lidský vrozený imunitní systém zdravých dobrovolníků in vivo, jak bylo ukázáno dříve u živé atenuované BCG vakcíny [7].

2. CÍLE

   Primární cíl: Zjistit, zda γ-ozářený BCG může trénovat vrozený imunitní systém in vivo, porovnáním produkce cytokinů po ex-vivo restimulaci s patogeny před, 2 týdny a 3 měsíce po vakcinaci y-ozářeným BCG.

3. STUDOVAT DESIGN

   Bude provedena explorativní intervenční studie v délce tří měsíců. Bude přijato 15 zdravých dobrovolníků, kteří podstoupí vakcinaci γ-ozářenou BCG. Po informovaném souhlasu bude před očkováním a 2 týdny a 3 měsíce po vakcinaci odebráno 40 ml krve.

4. STUDOVANÁ POPULACE 4.1 Populace Zdraví dobrovolníci, 18 - 55 let. 4.2 Kritéria pro zařazení Subjekty musí být zdraví dospělí ve věku 18 - 55 let. 4.3 Kritéria vyloučení Subjekty jsou vyloučeny, pokud jsou ze zemí s endemickým výskytem tuberkulózy, pokud byly v kontaktu s pacienty s tuberkulózou nebo pokud již byly očkovány BCG. Subjekty jsou ze studie vyloučeny, pokud trpí nějakou chorobou, včetně interkurentních infekcí. Subjektům není dovoleno užívat žádné léky kromě perorálních antikoncepčních látek.

   4.4 Výpočet velikosti vzorku Toto je explorativní pokus, u kterého výpočet velikosti vzorku není možný.

5. LÉČBA SUBJEKTŮ 5.1 Zkoumaný produkt/léčba Subjekty budou očkovány y-ozářenou BCG vakcínou (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]), která je zakoupena od Radboud Apotheek B.V.

   γ-Ozáření BCG vakcíny bude provádět Synergy Health Ede B.V., Ede, Nizozemsko (registrováno nizozemským ministerstvem hospodářství). BCG vakcína byla ozářena v originálním balení průměrnou dávkou 32,2 kGy v ozařovači JS6500 Tote Box Irradiator. Tato dávka je založena na v literatuře akceptované minimální dávce 25 kGy, která se ukázala jako dostatečná k usmrcení M. tuberculosis [10, 11]. Po ozáření bude vakcína vrácena neotevřená v původním obalu. Při ozařování je součástí dozimetr, takže ke každé ozařované dávce bude přiložen certifikát s přesnou použitou dávkou ozáření.

   5.2 Použití společné intervence Subjektům není dovoleno užívat žádné léky, s výjimkou perorální antikoncepce.

6. ZKOUŠENÝ PRODUKT 6.1 Název a popis hodnoceného produktu (produktů) y-Ozářená BCG vakcína (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]) dánský kmen 1331.

   6.2 Shrnutí poznatků z neklinických studií Účinnost usmrcování BCG vakcíny γ-zářením byla ověřena kultivací y-ozářeného BCG ve speciálním kultivačním médiu pro tuberkulózu. Po šesti týdnech nebyl zjištěn žádný růst.

   6.3 Shrnutí poznatků z klinických studií Související studie se srovnatelným uspořádáním studie, ve které bylo 20 zdravých dobrovolníků očkováno živou atenuovanou BCG vakcínou, již byla dokončena. [7] Studie vyšetřovatelů bude používat stejný protokol studie. Jediný rozdíl je v tom, že místo živé atenuované BCG vakcíny bude použita y-ozářená BCG vakcína.

   6.4 Shrnutí známých a potenciálních rizik a přínosů Pro dobrovolníky nejsou žádné jasné přínosy. Potenciální rizika jsou velmi malá, protože BCG je považována za bezpečnou vakcínu. BCG vakcinace může způsobit bolest a zjizvení v místě vpichu stejně jako horečku a bolest hlavy a velmi sporadicky se vyskytující vedlejší účinky jako synkopa, křeče a alergická reakce. V místě odběru krve může dojít k lokální tvorbě hematomu.

   6.5 Popis a zdůvodnění cesty podání a dávkování Aplikujte do horní části paže pomalu, asi za 10 sekund, intrakutánně 0,1 ml suspendované vakcíny, což představuje 0,075 mg Mycobacterium bovis.

7. METODY 7.1 Parametry studie/koncové body Před vakcinací a ve dvou různých časových bodech po vakcinaci γ-ozářeným BCG (2 týdny a 3 měsíce) bude odebrána krev, ze které budou PBMC izolovány hustotní centrifugací přes Ficoll-Paque. Monocyty budou restimulovány ex-vivo různými patogeny (M. tuberculosis (1 ug/ml), S. aureus, C. albicans (oba 1 x 1066 mikroorganismů/ml) a E. coli LPS (10 ng/ml). Produkce cytokinů bude hodnocena po 24 h (TNFa, IL lb a IL-6), 48 h (IFN, IL-10) a 7 dnech (IL-17, IL-22) stimulace a porovnána s produkcí cytokinů před vakcinací.

7.2 Postupy studie Subjekty budou očkovány y-ozářenou BCG vakcínou. Před a dvakrát po očkování bude odebráno 40 ml krve.

7.3 Odstoupení jednotlivých subjektů Subjekty mohou kdykoli z jakéhokoli důvodu opustit studii, pokud si to přejí bez jakýchkoli následků.

7.4 Výměna jednotlivých subjektů po odstoupení Každý vyřazený subjekt bude nahrazen tak, aby celkem 15 subjektů dokončilo sledování.