γ-облученная БЦЖ для тренировки врожденного иммунитета

1. ВВЕДЕНИЕ И ОБОСНОВАНИЕ

   Живая аттенуированная вакцина Bacillus Calmette-Guerin (BCG) защищает от внелегочной инфекции Mycobacterium tuberculosis и от лепры [1, 2]. Было показано, что вакцинация БЦЖ также приводит к неспецифическим защитным эффектам: раннее введение вакцины БЦЖ может привести к снижению детской смертности, в основном в результате снижения неонатального сепсиса, респираторных инфекций и лихорадки. [3-5] Кроме того, БЦЖ также используется у пациентов с раком мочевого пузыря, чтобы вызвать улучшенную реакцию иммунной системы, которая предотвращает прогрессирование опухоли и гибель. [6] Недавно было показано, что вакцинация БЦЖ может индуцировать эпигенетические изменения в моноцитах человека, что приводит к более высокому ответу провоспалительных цитокинов при повторной стимуляции неродственными патогенами in vitro. [7] Предполагается, что наблюдаемые эффекты связаны с модуляцией врожденной иммунной системы человека в процессе, называемом «тренированный иммунитет». При стимуляции патогеном врожденная иммунная система активируется и способна быстрее и эффективнее реагировать на вторичный (и несвязанный) раздражитель. [7, 8]

   Принимая во внимание эти положительные эффекты БЦЖ на врожденную защиту хозяина, разумно предположить, что было бы полезно создать «статус обученного иммунитета» у хозяев с дефектом Т- и В-клеточного иммунитета, поскольку они более уязвимы для инфекций. Однако из-за ослабленного иммунитета таких пациентов нельзя вакцинировать живыми аттенуированными вакцинами (например, БЦЖ). [9] Вакцинация γ-облученной БЦЖ возможна, но неизвестно, оказывает ли γ-облученная вакцина такое же защитное неспецифическое действие на врожденную защиту хозяина. В недавних экспериментах in vitro исследователи продемонстрировали, что γ-облученная БЦЖ может тренировать моноциты in vitro (не опубликовано). Таким образом, целью данного исследования является определение того, способна ли γ-облученная БЦЖ тренировать врожденную иммунную систему человека здоровых добровольцев in vivo, как это было показано ранее с живой аттенуированной вакциной БЦЖ [7].

2. ЦЕЛИ

   Основная цель: определить, может ли γ-облученная БЦЖ тренировать врожденную иммунную систему in vivo, путем сравнения продукции цитокинов при повторной стимуляции ex-vivo с патогенами до, через 2 недели и 3 месяца после вакцинации γ-облученной БЦЖ.

3. ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ

   Будет проведено предварительное интервенционное исследование продолжительностью три месяца. 15 здоровых добровольцев будут набраны для вакцинации γ-облученной БЦЖ. После информированного согласия будет взято 40 мл крови перед вакцинацией и через 2 недели и 3 месяца после вакцинации.

4. ИССЛЕДУЕМОЕ НАСЕЛЕНИЕ 4.1 Население Здоровые добровольцы в возрасте от 18 до 55 лет. 4.2 Критерии включения Субъекты должны быть здоровыми взрослыми в возрасте от 18 до 55 лет. 4.3 Критерии исключения Субъекты исключаются, если они из стран, эндемичных по туберкулезу, если они были в контакте с больными туберкулезом или если они уже были вакцинированы БЦЖ. Субъекты исключаются из исследования, если они страдают каким-либо заболеванием, включая интеркуррентные инфекции. Субъектам не разрешается использовать какие-либо лекарства, кроме пероральных противозачаточных средств.

   4.4 Расчет размера выборки Это исследовательское испытание, для которого расчет размера выборки невозможен.

5. ЛЕЧЕНИЕ СУБЪЕКТОВ 5.1 Исследуемый продукт/лечение Субъекты будут вакцинированы вакциной БЦЖ, облученной γ-излучением (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]), которая закупается у Radboud Apotheek B.V.

   γ-облучение вакцины БЦЖ будет проводиться компанией Synergy Health Ede B.V., Эде, Нидерланды (зарегистрирована в Министерстве экономики Нидерландов). Вакцину БЦЖ облучали в оригинальной упаковке средней дозой 32,2 кГр в облучателе JS6500 Tote Box. Эта доза основана на принятой в литературе минимальной дозе 25 кГр, которая, как было доказано, является достаточной для уничтожения M.tuberculosis [10, 11]. После облучения вакцина будет возвращена невскрытой в оригинальной упаковке. Во время облучения в комплект входит дозиметр, поэтому к каждой облучаемой партии прилагается сертификат с точной использованной дозой облучения.

   5.2 Использование совместного вмешательства Субъектам не разрешается использовать какие-либо лекарства, кроме пероральных противозачаточных средств.

6. ПРОДУКТ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЙ 6.1 Название и описание продукта(ов) для исследования Облученная вакцина БЦЖ (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]), датский штамм 1331.

   6.2 Резюме результатов доклинических исследований Эффективность уничтожения вакцины БЦЖ гамма-облучением была подтверждена путем культивирования облученной гамма-излучением БЦЖ в специальной культуральной среде для туберкулеза. Никакого роста не было обнаружено через шесть недель.

   6.3 Резюме результатов клинических исследований Уже проведено родственное исследование с сопоставимой постановкой, в котором 20 здоровых добровольцев были вакцинированы живой аттенуированной вакциной БЦЖ. [7] Исследование исследователей будет использовать тот же протокол исследования. Единственное отличие состоит в том, что вместо живой аттенуированной вакцины БЦЖ будет использоваться гамма-облученная вакцина БЦЖ.

   6.4 Краткое изложение известных и потенциальных рисков и преимуществ Нет явных преимуществ для добровольцев. Потенциальные риски очень малы, так как БЦЖ считается безопасной вакциной. Вакцинация БЦЖ может вызвать боль и рубцевание в месте инъекции, а также лихорадку и головную боль, а также очень спорадически возникающие побочные эффекты, такие как обмороки, судороги и аллергические реакции. В месте взятия крови может образоваться локальная гематома.

   6.5 Описание и обоснование пути введения и дозировки Медленно, примерно за 10 секунд, в предплечье введите 0,1 мл суспензионной вакцины внутрикожно, что составляет 0,075 мг Mycobacterium bovis.

7. МЕТОДЫ 7.1 Параметры исследования/конечные точки Перед вакцинацией и в два разных момента времени после вакцинации γ-облученной БЦЖ (2 недели и 3 месяца) берут кровь, из которой РВМС выделяют центрифугированием в плотности над Фиколлом-Паком. Моноциты будут рестимулированы ex vivo различными патогенами (M. tuberculosis (1 мкг/мл), S. aureus, C. albicans (оба 1 x 10^6 микроорганизмов/мл) и ЛПС E. coli (10 нг/мл). Продукцию цитокинов оценивают через 24 часа (TNFa, IL-1b и IL-6), 48 часов (IFN, IL-10) и 7 дней (IL-17, IL-22) стимуляции и сравнивают с продукцией цитокинов до вакцинации.

7.2 Процедуры исследования Субъекты будут вакцинированы вакциной БЦЖ, облученной γ-излучением. До вакцинации и дважды после нее берут по 40 мл крови.

7.3 Выход отдельных субъектов Субъекты могут выйти из исследования в любое время по любой причине, если они желают сделать это без каких-либо последствий.

7.4 Замена отдельных субъектов после отмены Каждый исключенный субъект будет заменен, чтобы в общей сложности 15 субъектов завершили последующее наблюдение.