γ-säteilytetty BCG synnynnäisen immuniteetin kehittämiseen

1. JOHDANTO JA PERUSTELUT

   Elävä, heikennetty Bacillus Calmette-Guerin (BCG) -rokote suojaa Mycobacterium tuberculosis -bakteerin aiheuttamalta ekstrapulmonaariselta infektiolta ja spitaalilta [1, 2]. On osoitettu, että BCG-rokotus johtaa myös epäspesifisiin suojaaviin vaikutuksiin: BCG-rokotuksen varhainen antaminen voi johtaa lapsikuolleisuuden vähenemiseen pääasiassa vastasyntyneen sepsiksen, hengitystieinfektion ja kuumeen vähentymisen seurauksena. [3-5] Lisäksi BCG:tä on käytetty myös potilailla, joilla on virtsarakon syöpä, parantamaan immuunijärjestelmän reaktiota, mikä estää kasvaimen etenemisen ja kuoleman. [6] Äskettäin osoitettiin, että BCG-rokote voi indusoida epigeneettisiä muutoksia ihmisen monosyyteissä, mikä johtaa korkeampaan proinflammatoriseen sytokiinivasteeseen, kun se stimuloidaan uudelleen ei-sukuisilla patogeeneillä in vitro. [7] Havaittujen vaikutusten oletetaan johtuvan ihmisen synnynnäisen immuunijärjestelmän modulaatiosta prosessissa, jota kutsutaan "koulutetuksi immuniteetiksi". Stimuloitaessa taudinaiheuttajalla synnynnäinen immuunijärjestelmä alkaa toimia ja pystyy reagoimaan nopeammin ja tehokkaammin toissijaiseen (ja ei-liittyvään) ärsykkeeseen. [7, 8]

   Ottaen huomioon nämä BCG:n suotuisat vaikutukset synnynnäiseen isäntäpuolustukseen, on järkevää olettaa, että olisi hyödyllistä luoda "koulutettu immuniteetti" isännille, joilla on puutteellinen T- ja B-soluimmuniteetti, koska ne ovat alttiimpia infektioille. Heidän immuunivastensa vuoksi näitä potilaita ei kuitenkaan voida rokottaa elävillä heikennetyillä rokotteilla (esim. BCG). [9] Rokotus y-säteilytetyllä BCG:llä olisi mahdollista, mutta ei tiedetä, onko y-säteilytetyllä rokotteella samat suojaavat, epäspesifiset vaikutukset isännän synnynnäiseen puolustukseen. Viimeaikaisissa in vitro -kokeissa tutkijat ovat osoittaneet, että y-säteilytetty BCG voi kouluttaa monosyyttejä in vitro (ei julkaistu). Siksi tämän tutkimuksen tavoitteena on määrittää, pystyykö γ-säteilytetty BCG kouluttamaan ihmisen luontaista immuunijärjestelmää terveiden vapaaehtoisten in vivo, aivan kuten aiemmin on osoitettu elävän heikennetyn BCG-rokotteen kanssa [7].

2. TAVOITTEET

   Ensisijainen tavoite: Määrittää, voiko y-säteilytetty BCG kouluttaa synnynnäistä immuunijärjestelmää in vivo, vertaamalla sytokiinituotantoa ex vivo -uudelleenstimulaation jälkeen patogeeneillä ennen rokotusta, 2 viikkoa ja 3 kuukautta y-säteilytetyllä BCG:llä rokotuksen jälkeen.

3. OPINTUSUUNNITTELU

   Tehdään kolmen kuukauden mittainen interventiotutkimus. 15 tervettä vapaaehtoista rekrytoidaan saamaan γ-säteilytetyn BCG-rokotteen. Tietoisen suostumuksen jälkeen otetaan 40 ml verta ennen rokotusta ja 2 viikkoa ja 3 kuukautta rokotuksen jälkeen.

4. TUTKIMUSVÄESTÖ 4.1 Väestö Terveet vapaaehtoiset, 18-55 v. 4.2 Osallistumiskriteerit Tutkittavien tulee olla terveitä aikuisia, iältään 18-55 vuotta. 4.3 Poissulkemiskriteerit Koehenkilöt suljetaan pois, jos he ovat kotoisin tuberkuloosin endeemisistä maista, jos he ovat olleet tekemisissä tuberkuloosipotilaiden kanssa tai jos he ovat jo saaneet BCG-rokotuksen. Koehenkilöt suljetaan pois tutkimuksesta, jos he kärsivät jostain sairaudesta, mukaan lukien väliaikainen infektio. Koehenkilöt eivät saa käyttää muita lääkkeitä paitsi suun kautta otettavia ehkäisylääkkeitä.

   4.4 Otoskoon laskenta Tämä on tutkiva koe, jolle otoskoon laskenta ei ole mahdollista.

5. KOHTIEN HOITO 5.1 Tutkimustuote/hoito Kohteet rokotetaan y-säteilytetyllä BCG-rokotteella (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]), joka on hankittu Radboud Apotheek B.V.:ltä.

   BCG-rokotteen γ-säteilytyksen suorittaa Synergy Health Ede B.V., Ede, Alankomaat (rekisteröity Hollannin talousministeriössä). BCG-rokote säteiltiin alkuperäisessä pakkauksessa keskimääräisellä annoksella 32,2 kGy JS6500 Tote Box -säteilytyslaitteessa. Tämä annos perustuu kirjallisuudessa hyväksyttyyn 25 kGy:n vähimmäisannokseen, jonka on todistettu olevan riittävä tappamaan M. tuberculosis [10, 11]. Säteilytyksen jälkeen rokote palautetaan avaamattomana alkuperäispakkauksessa. Säteilytyksen aikana mukana tulee annosmittari, joten jokaisen säteilytetyn erän mukana tulee todistus, jossa on tarkka käytetty säteilyannos.

   5.2 Yhteistoimien käyttö Koehenkilöt eivät saa käyttää mitään lääkitystä, paitsi suun kautta tapahtuvaa raskaudenestohoitoa.

6. TUTKIMUSTUOTE 6.1 Tutkittavan tuotteen nimi ja kuvaus y-säteilytetty BCG-rokote (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]) tanskalainen kanta 1331.

   6.2 Yhteenveto ei-kliinisistä tutkimuksista saaduista löydöksistä BCG-rokotteen γ-säteilytyksellä tapahtuvan tappamisen tehokkuus varmistettiin viljelemällä y-säteilytettyä BCG:tä erityisessä tuberkuloosiviljelyalustassa. Kasvua ei havaittu kuuden viikon jälkeen.

   6.3 Yhteenveto kliinisistä tutkimuksista saaduista tuloksista Vastaava tutkimus, jossa 20 tervettä vapaaehtoista rokotettiin elävällä heikennetyllä BCG-rokotteella, on jo suoritettu. [7] Tutkijoiden tutkimuksessa käytetään samaa tutkimusprotokollaa. Ainoa ero on, että elävän heikennetyn BCG-rokotteen sijasta käytetään y-säteilytettyä BCG-rokotetta.

   6.4 Yhteenveto tunnetuista ja mahdollisista riskeistä ja hyödyistä Vapaaehtoisille ei ole selvää hyötyä. Mahdolliset riskit ovat hyvin pieniä, koska BCG:tä pidetään turvallisena rokotteena. BCG-rokotus voi aiheuttaa kipua ja arpia pistoskohdassa, kuten kuumetta ja päänsärkyä, ja hyvin satunnaisia ​​sivuvaikutuksia, kuten pyörtymistä, kouristuksia ja allergisia reaktioita. Verenottokohdassa voi esiintyä paikallista hematooman muodostumista.

   6.5 Antoreitin ja annostuksen kuvaus ja perustelut Anna olkavarteen hitaasti, noin 10 sekunnissa, ihonsisäisesti 0,1 ml suspendoitua rokotetta, joka vastaa 0,075 mg Mycobacterium bovis -bakteeria.

7. MENETELMÄT 7.1 Tutkimusparametrit/päätepisteet Ennen rokotusta ja kahdessa eri ajankohdassa γ-säteilytetyllä BCG:llä rokotuksen jälkeen (2 viikkoa ja 3 kuukautta) otetaan verta, josta PBMC:t eristetään tiheyssentrifugoinnilla Ficoll-Paquella. Monosyytit stimuloidaan uudelleen ex vivo eri patogeeneillä (M. tuberculosis (1 ug/ml), S. aureus, C. albicans (molemmat 1 x 10^6 mikro-organismia/ml) ja E. coli LPS (10 ng/ml). Sytokiinituotanto arvioidaan 24 tunnin (TNFa, IL 1b ja IL-6), 48 tunnin (IFN, IL-10) ja 7 päivän (IL-17, IL-22) stimulaation jälkeen ja verrataan sytokiinien tuotantoon ennen rokotusta.

7.2 Tutkimusmenettelyt Koehenkilöt rokotetaan y-säteilytetyllä BCG-rokotteella. Ennen rokotusta ja kaksi kertaa sen jälkeen otetaan 40 ml verta.

7.3 Yksittäisten koeaineiden peruuttaminen Koehenkilöt voivat halutessaan poistua tutkimuksesta milloin tahansa mistä tahansa syystä ilman seurauksia.

7.4 Yksittäisten koehenkilöiden korvaaminen vetäytymisen jälkeen Jokainen peruutettu koehenkilö korvataan siten, että yhteensä 15 koehenkilöä suorittaa seurannan.