自然免疫を訓練するためのγ線照射BCG

1. 導入と理論的根拠

   弱毒生カルメット-ゲラン (BCG) ワクチンは、結核菌による肺外感染およびハンセン病から保護します [1、2]。 BCG によるワクチン接種も非特異的な保護効果につながることが示されています。BCG ワクチンの早期投与は、主に新生児敗血症、呼吸器感染症、および発熱の減少の結果として、子供の死亡率の減少につながる可能性があります。 [3-5] さらに、BCG は膀胱癌患者にも使用され、免疫系の改善された反応を誘発し、腫瘍の進行と死亡を防ぎます。 [6] 最近、BCG ワクチン接種がヒト単球のエピジェネティックな変化を誘発し、in vitro で無関係な病原体による再刺激により炎症誘発性サイトカイン応答が高まることが示されました。 [7] 観察された効果は、「訓練された免疫」と呼ばれるプロセスにおけるヒトの自然免疫系の調節によるものであると提案されています。 病原体による刺激を受けると、自然免疫系がプライミングされ、二次的な (そして無関係な) 刺激に対してより迅速かつ効率的に反応できるようになります。 [7、8]

   先天性宿主防御に対するBCGのこれらの有益な効果を考慮すると、感染に対してより脆弱であるため、T細胞およびB細胞免疫に欠陥のある宿主で「訓練された免疫状態」を生成することが役立つという仮説を立てることは合理的です. しかし、免疫力が低下しているため、これらの患者は弱毒生ワクチンを接種することができません。 BCG）。 [9] γ 線を照射した BCG によるワクチン接種は可能ですが、γ 線を照射したワクチンが宿主の自然防御に対して同様の非特異的な防御効果を持っているかどうかは不明です。 最近の in vitro 実験で、研究者らは、y 線を照射した BCG が in vitro で単球を訓練できることを実証しました (未発表)。 したがって、この研究の目的は、弱毒生BCGワクチンで以前に示したように、γ線を照射したBCGが健康なボランティアのヒト自然免疫系を生体内で訓練できるかどうかを判断することです[7]。

2. 目的

   主な目的: γ 線を照射した BCG を接種する前、2 週間後、および 3 か月後に、ex-vivo 再刺激時のサイトカイン産生を病原体と比較することにより、γ 線を照射した BCG が in vivo で自然免疫系を訓練できるかどうかを判断すること。

3. 研究デザイン

   3か月間の探索的介入研究が実施されます。 15人の健康なボランティアが募集され、γ線を照射したBCGによるワクチン接種を受けます。 インフォームド コンセントの後、40ml の血液がワクチン接種前とワクチン接種後 2 週間および 3 か月に採取されます。

4. 研究集団 4.1 集団 18～55 歳の健康なボランティア。 4.2 包含基準 被験者は 18 ～ 55 歳の健康な成人でなければなりません。 4.3 除外基準 対象者が結核流行国の出身である場合、結核患者と接触したことがある場合、またはすでに BCG ワクチン接種を受けている場合は除外されます。 被験者は、併発感染を含む何らかの疾患に罹患している場合、研究から除外されます。 被験者は、経口避妊薬以外の薬を使用することはできません。

   4.4 サンプルサイズの計算 これは探索的試験であり、サンプルサイズの計算はできません。

5. 被験者の治療 5.1 治験薬/治療 被験者は、Radboud Apotheek B.V.

   BCGワクチンのγ線照射は、オランダのエーデにあるSynergy Health Ede B.V.（オランダ経済省により登録）によって実施されます。 BCG ワクチンは、JS6500 トート ボックス照射器で平均 32.2kGy の線量で元のパッケージに照射されました。 この線量は、結核菌を殺すのに十分であることが証明されている、文献で認められている 25kGy の最小線量に基づいています [10, 11] 。 照射後、ワクチンは元の包装のまま未開封で返送されます。 照射中は線量計が含まれているため、照射された各バッチには、使用された正確な照射線量が記載された証明書が付属しています。

   5.2 共介入の使用 被験者は、経口避妊薬を除いて、いかなる薬物の使用も許可されていません。

6. 治験薬 6.1 治験薬の名称と説明 γ-照射 BCG ワクチン (BCG-Vaccin SSI [Nederlands Vaccin Instituut]) デンマーク株 1331。

   6.2 非臨床試験結果のまとめ BCGワクチンのγ線照射による殺傷効果は、γ線を照射したBCGを特殊な結核菌培養液で培養することにより検証された。 6週間後、成長は検出されませんでした。

   6.3 臨床研究から得られた知見のまとめ 20 人の健康な志願者が弱毒生 BCG ワクチンを接種された、同等の研究設定による関連研究がすでに行われています。 [7] 治験責任医師の研究は、同じ研究プロトコルを使用します。 唯一の違いは、弱毒生BCGワクチンの代わりにγ線照射BCGワクチンが使用されることです。

   6.4 既知および潜在的なリスクと利点のまとめ ボランティアにとって明確な利点はありません。 BCGは安全なワクチンと考えられているため、潜在的なリスクは非常に小さい. BCGワクチン接種は、発熱や頭痛と同様に注射部位に痛みや瘢痕を引き起こし、失神、痙攣、アレルギー反応などの非常に散発的な副作用を引き起こす可能性があります. 採血部位に局所血腫が形成されることがあります。

   6.5 投与経路および投与量の説明と正当化 Mycobacterium bovis 0.075mg に相当する懸濁ワクチン 0.1ml を上腕に約 10 秒かけてゆっくりと皮内投与する。

7. 方法 7.1 研究パラメーター/エンドポイント ワクチン接種前と、γ線を照射した BCG のワクチン接種後の 2 つの異なる時点 (2 週間および 3 か月) に血液を採取し、そこから Ficoll-Paque での密度遠心分離によって PBMC を分離します。 単球は、異なる病原体で生体外で再刺激されます (M. 結核 (1µg/ml)、S. aureus、C. albicans (両方とも 1 x 10^6 微生物/ml)、および E. coli LPS (10ng/ml)。 サイトカイン産生は、24時間（TNFa、IL 1bおよびIL-6）、48時間（IFN、IL-10）および7日（IL-17、IL-22）刺激後に評価され、ワクチン接種前のサイトカイン産生と比較されます。

7.2 試験手順 被験者はγ線を照射したBCGワクチンを接種されます。 接種前と接種後の2回、40mlの採血を行います。

7.3 個々の被験者の中止 被験者は、結果を伴わずに希望すれば、理由の如何を問わず、いつでも研究を中止することができます。

7.4 中止後の個々の被験者の交換 合計 15 人の被験者がフォローアップを完了するために、中止された各被験者は交換されます。