改进常见变异型免疫缺陷病的诊断

对细菌和病毒感染的易感性增加是原发性免疫缺陷 (PID) 的标志。 最常见的需要用 Ig 替代疗法（SCIg 或 IVIg）治疗的 PID 是常见变异性免疫缺陷病 (CVID)，通过存在低丙种球蛋白血症和对疫苗抗原的反应缺陷来诊断。 在诊断之前，CVID 患者通常会出现需要免疫抑制的自身免疫或需要化疗的癌症。 不幸的是，在接受免疫抑制药物、类固醇或化学疗法治疗的成人中诊断 CVID 时出现了困难，从而阻碍了对这些患者及时使用 Ig 替代疗法。 此外，CVID 在年幼儿童中难以诊断。 迄今为止，外显子组测序和其他遗传方法未能确定 CVID 的明确单基因原因。 同时，STAT1、STAT3、NFKB、PI3K等信号通路紊乱的患者存在临床抗体缺陷，提示通过检查信号通路，研究者可以发现CVID的迹象。 研究人员建议使用广泛的新屏幕来研究 CVID 中人类免疫反应的功能缺陷。 使用飞行时间质谱流式细胞术 (CyTOF) 和磷酸化特异性抗体，研究人员将同时检查所有循环先天和适应性免疫细胞类型的主要信号通路，以识别信号分子响应各种异常的异常磷酸化规范刺激。 这种方法是创新的，因为它识别免疫反应中的信号缺陷，同时对化疗或免疫抑制不敏感，因为检查的信号反应在免疫抑制靶标的生物学上游。 我们的方法生成了一个新的“信号指纹”，用于促进 CVID 的诊断。 我们的提议也很有影响力，因为在 CVID 中获得的有关功能缺陷的知识与全外显子组测序相结合，将提高对人类对感染的免疫反应的一般理解。

有两个主要目标：1) 研究不同年龄段的健康对照受试者，将其与 CVID 患者进行比较，并进一步生成有关免疫信号反应如何随年龄变化的新信息，这目前是未知的；2) 研究 CVID 患者以确定一致的异常信号反应，这将允许加速诊断和治疗。

研究设计：研究人员提出了一项观察性病例对照研究，在两个队列、抗体缺陷 (CVID) 患者和健康对照之间进行单次抽血。 方法：五十 (50) 名 CVID 患者（成人和儿童）将在加州大学洛杉矶分校的免疫学诊所获得同意。 将同时寻求健康、年龄和性别匹配的对照 (100)。 将抽取一份 < 5 mL 的血液，立即在 UCLA 进行磷酸化 CyTOF 分析。 基因组 DNA 将从样品和分析的序列中制备。

该屏幕同时检查所有循环免疫细胞类型（CD4 和 CD8 T 细胞、B 细胞、NK 细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和 DC）的磷酸化。 来自受试者和来自对照的全血将被等分成部分，并且每个部分将用细胞因子、TLR激动剂、抗-TCR或抗-BCR抗体、PMA刺激，或不被刺激。 处理过的细胞将进行表面染色、固定、透化和细胞内染色以检测 12 种信号磷酸化蛋白，然后通过 CyTOF 进行分析，从而可以同时测量 50 多个参数。