Melhorando o diagnóstico de imunodeficiência comum variável

Uma maior suscetibilidade a infecções bacterianas e virais é a marca registrada das imunodeficiências primárias (IDPs). A IDP mais comum que requer tratamento com reposição de Ig (SCIg ou IVIg) é a Imunodeficiência Comum Variável (CVID), diagnosticada pela presença de hipogamaglobulinemia mais respostas defeituosas aos antígenos vacinais. Antes do diagnóstico, os pacientes com IDCV geralmente desenvolvem autoimunidade que requer imunossupressão ou cânceres que requerem quimioterapia. Infelizmente, surgem dificuldades no diagnóstico de IDCV em adultos tratados com drogas imunossupressoras, esteróides ou quimioterapia, impedindo o uso oportuno de terapias de reposição de Ig nesses pacientes. Além disso, a IDCV é difícil de diagnosticar em crianças pequenas. O sequenciamento do exoma e outros métodos genéticos falharam até agora em identificar causas monogênicas claras para ICV. Ao mesmo tempo, pacientes com distúrbios das vias de sinalização, incluindo STAT1, STAT3, NFKB, PI3K e outras, apresentam deficiência clínica de anticorpos, sugerindo que, ao examinar as vias de sinalização, os investigadores poderiam encontrar sinais de ICV. Os investigadores propõem usar uma nova tela ampla para estudar os defeitos funcionais das respostas imunes humanas em CVID. Usando citometria de massa time-of-flight (CyTOF) e anticorpos fosfoespecíficos, os investigadores examinarão simultaneamente as principais vias de sinalização de todos os tipos de células imunes inatas e adaptativas circulantes de uma só vez para identificar a fosforilação anormal de moléculas de sinalização em resposta a uma variedade de estímulos canônicos. Este método é inovador porque identifica defeitos de sinalização na resposta imune, sendo insensível à quimioterapia ou imunossupressão, porque as respostas de sinalização examinadas são biologicamente a montante de alvos imunossuprimidos. Nossa abordagem gera uma nova "impressão digital de sinalização" para facilitar o diagnóstico de IDCV. Nossa proposta também é impactante, porque o conhecimento adquirido sobre defeitos funcionais em ICV, quando combinado com o sequenciamento completo do exoma, irá melhorar a compreensão geral da resposta imune humana às infecções.

Existem dois objetivos principais: 1) estudar indivíduos de controle saudáveis ​​em várias idades como comparações com pacientes com IDCV e, além disso, gerar novas informações sobre como as respostas de sinalização imune mudam com a idade, o que é atualmente desconhecido; e 2) estudar pacientes com IDCV para identificar as respostas de sinalização aberrantes consistentes que permitirão a aceleração do diagnóstico e tratamento.

Desenho do estudo: Os investigadores propõem um estudo observacional de caso-controle com uma única coleta de sangue entre duas coortes, pacientes com deficiência de anticorpos (CVID) e controles saudáveis. Métodos: Cinquenta (50) pacientes com ICV (adultos e crianças) serão admitidos na Clínica de Imunologia da UCLA. Controles saudáveis, pareados por idade e gênero serão procurados ao mesmo tempo (100). Haverá uma coleta de sangue de < 5 mL de sangue para ser analisada imediatamente por fosfo-CyTOF na UCLA. O DNA genômico será preparado a partir de amostras e sequências analisadas.

Esta tela examina a fosforilação de todos os tipos de células imunes circulantes de uma só vez (células T CD4 e CD8, células B, células NK, monócitos, macrófagos, neutrófilos, eosinófilos e DCs). O sangue total dos indivíduos e dos controles será dividido em porções, e cada porção será estimulada com citocinas, agonistas de TLR, anticorpos anti-TCR ou anti-BCR, PMA ou não estimulada. As células tratadas serão coradas na superfície, fixadas, permeabilizadas e coradas intracelularmente para 12 fosfoproteínas de sinalização, depois analisadas por CyTOF, que permite a medição de mais de 50 parâmetros simultaneamente.