Yleisen muuttuvan immuunipuutoksen diagnoosin parantaminen

Lisääntynyt alttius bakteeri- ja virusinfektioille on tyypillinen primaarinen immuunipuutos (PID). Yleisin Ig-korvaushoitoa (SCIg tai IVIg) vaativa PID on yleinen muuttuva immuunivajaus (CVID), joka diagnosoidaan hypogammaglobulinemian sekä puutteellisten vasteiden perusteella rokoteantigeeneille. Ennen diagnoosia CVID-potilaille kehittyy usein immunosuppressiota vaativa autoimmuniteetti tai kemoterapiaa vaativat syövät. Valitettavasti CVID-diagnoosin tekemisessä on vaikeuksia aikuisilla, joita hoidetaan immunosuppressiivisilla lääkkeillä, steroideilla tai kemoterapialla, mikä estää Ig-korvaushoitojen oikea-aikaisen käytön näillä potilailla. Lisäksi CVID on vaikea diagnosoida pienillä lapsilla. Exome-sekvensointi ja muut geneettiset menetelmät eivät ole toistaiseksi onnistuneet tunnistamaan selkeitä monogeenisiä syitä CVID:iin. Samaan aikaan potilailla, joilla on poikkeavuuksia signalointireiteissä, mukaan lukien STAT1, STAT3, NFKB, PI3K ja muut, on kliininen vasta-ainepuutos, mikä viittaa siihen, että tutkimalla signalointireittejä tutkijat voivat löytää merkkejä CVID:stä. Tutkijat ehdottavat laajan uuden näytön käyttämistä ihmisen immuunivasteiden toiminnallisten puutteiden tutkimiseen CVID:ssä. Käyttämällä lentoaikamassasytometriaa (CyTOF) ja fosfospesifisiä vasta-aineita, tutkijat tutkivat samanaikaisesti kaikkien kiertävien synnynnäisten ja adaptiivisten immuunisolutyyppien tärkeimpiä signalointireittejä kerralla tunnistaakseen signaalimolekyylien epänormaalin fosforylaation vasteena erilaisille häiriöille. kanonisia ärsykkeitä. Tämä menetelmä on innovatiivinen, koska se tunnistaa immuunivasteen signalointivirheet, vaikka se ei ole herkkä kemoterapialle tai immunosuppressiolle, koska tutkitut signaalivasteet ovat biologisesti immunosuppressoitujen kohteiden ylävirtaan. Lähestymistapamme luo uuden "signalointisormenjäljen" CVID-diagnoosin helpottamiseksi. Ehdotuksemme on myös vaikuttava, koska CVID:n toiminnallisista puutteista saatu tieto yhdistettynä koko eksomin sekvensointiin parantaa yleistä ymmärrystä ihmisen immuunivasteesta infektioita vastaan.

On olemassa kaksi päätavoitetta: 1) tutkia eri ikäisiä terveitä kontrollihenkilöitä vertailuna CVID-potilaisiin ja lisäksi tuottaa uutta tietoa siitä, kuinka immuunisignaalivasteet muuttuvat iän myötä, mikä on tällä hetkellä tuntematon; ja 2) tutkia CVID-potilaita tunnistaa johdonmukaiset poikkeavat signaalivasteet, jotka mahdollistavat diagnoosin ja hoidon nopeuttamisen.

Tutkimuksen suunnittelu: Tutkijat ehdottavat havainnoivaa tapauskontrollitutkimusta, jossa on yksi verinäyte kahdesta kohortista, potilaista, joilla on vasta-ainepuutos (CVID) ja terveillä kontrolleilla. Menetelmät: Viisikymmentä (50) CVID-potilasta (aikuinen ja lapsi) hyväksytään UCLA:n immunologiaklinikalla. Terveitä, iän ja sukupuolen mukaan vastaavia kontrolleja haetaan samaan aikaan (100). Otetaan yksi < 5 ml:n verta, joka analysoidaan välittömästi fosfo-CyTOF:lla UCLA:ssa. Genominen DNA valmistetaan näytteistä ja analysoiduista sekvensseistä.

Tämä seulonta tutkii kaikkien kiertävien immuunisolutyyppien fosforylaatiota kerralla (CD4- ja CD8-T-solut, B-solut, NK-solut, monosyytit, makrofagit, neutrofiilit, eosinofiilit ja DC:t). Koehenkilöiden ja kontrollien kokoveri jaetaan osiin, ja jokainen osa stimuloidaan joko sytokiineilla, TLR-agonisteilla, anti-TCR- tai anti-BCR-vasta-aineilla, PMA:lla tai jätetään stimuloimatta. Käsitellyt solut pintavärjätään, kiinnitetään, permeabilisoidaan ja värjätään solunsisäisesti 12 signaloivan fosfoproteiinin suhteen, minkä jälkeen ne analysoidaan CyTOF:lla, mikä mahdollistaa yli 50 parametrin mittaamisen samanaikaisesti.