A gyakori változó immunhiány diagnózisának javítása

A bakteriális és vírusos fertőzésekkel szembeni fokozott fogékonyság a primer immundeficienciák (PID-ek) jellemzője. A leggyakoribb Ig-pótlást (SCIg vagy IVIg) igénylő PID a gyakori változó immunhiány (CVID), amelyet hipogammaglobulinémia jelenléte, valamint az oltóanyag-antigénekre adott hibás válaszok diagnosztizálnak. A diagnózis felállítása előtt a CVID-betegeknél gyakran alakul ki autoimmunitás, amely immunszuppressziót igényel, vagy kemoterápiát igénylő rákos megbetegedések. Sajnos az immunszuppresszív gyógyszerekkel, szteroidokkal vagy kemoterápiával kezelt felnőtteknél nehézségek merülnek fel a CVID diagnózisában, ami megakadályozza az Ig-pótló terápia időben történő alkalmazását ezeknél a betegeknél. Ezenkívül a CVID-t nehéz diagnosztizálni kisgyermekeknél. Az exome szekvenálás és más genetikai módszerek mindeddig nem tudták azonosítani a CVID egyértelmű monogén okait. Ugyanakkor azoknál a betegeknél, akiknél a jelátviteli útvonalak, köztük a STAT1, STAT3, NFKB, PI3K és mások, rendellenességei vannak, klinikai antitesthiányban szenvednek, ami arra utal, hogy a jelátviteli útvonalak vizsgálatával a kutatók CVID jeleit találhatják. A nyomozók azt javasolják, hogy széles, új képernyőt alkalmazzanak az emberi immunválasz funkcionális hibáinak tanulmányozására CVID-ben. A repülési idő tömegcitometriája (CyTOF) és a foszfo-specifikus antitestek segítségével a kutatók egyszerre vizsgálják meg az összes keringő veleszületett és adaptív immunsejttípus főbb jelátviteli útvonalait, hogy azonosítsák a jelzőmolekulák abnormális foszforilációját válaszként számos kanonikus ingerek. Ez a módszer innovatív, mert azonosítja az immunválasz jelátviteli hibáit, miközben érzéketlen a kemoterápiára vagy az immunszuppresszióra, mivel a vizsgált jelátviteli válaszok biológiailag az immunszuppresszált célpontok előtt vannak. Megközelítésünk egy új „jelző ujjlenyomatot” hoz létre a CVID diagnosztizálásának megkönnyítésére. Javaslatunk azért is hatásos, mert a CVID funkcionális hibáiról szerzett ismeretek teljes exome szekvenálással kombinálva javítják a fertőzésekre adott emberi immunválasz általános megértését.

Két fő célja van: 1) egészséges kontrollalanyok tanulmányozása különböző életkorban a CVID-betegekkel való összehasonlítás céljából, valamint új információk előállítása arról, hogyan változnak az immunrendszer jelátviteli válaszai az életkorral, ami jelenleg nem ismert; és 2) CVID-betegek tanulmányozása. azonosítani a következetes aberráns jelátviteli válaszokat, amelyek lehetővé teszik a diagnózis és a kezelés felgyorsítását.

A vizsgálat megtervezése: A kutatók megfigyeléses, eset-kontroll vizsgálatot javasolnak egyetlen vérvétellel két kohorsz, antitesthiányos (CVID) betegek és egészséges kontrollok körében. Módszerek: Ötven (50) CVID-beteg (felnőtt és gyermek) beleegyezése az UCLA Immunológiai Klinikáján történik. Egészséges, életkornak és nemnek megfelelő kontrollokat egyidejűleg keresnek (100). Egy alkalommal < 5 ml vért veszünk, amelyet azonnal foszfo-CyTOF-fel kell elemezni az UCLA-n. A genomi DNS-t mintákból és elemzett szekvenciákból állítják elő.

Ez a képernyő egyszerre vizsgálja az összes keringő immunsejttípus (CD4 és CD8 T-sejtek, B-sejtek, NK-sejtek, monociták, makrofágok, neutrofilek, eozinofilek és DC-k) foszforilációját. Az alanyoktól és a kontrolloktól származó teljes vért részekre osztják, és minden egyes részt citokinekkel, TLR-agonistákkal, anti-TCR vagy anti-BCR antitestekkel, PMA-val vagy stimulálatlanul hagynak. A kezelt sejteket felületen megfestik, fixálják, permeabilizálják és intracellulárisan festik 12 jelátviteli foszfoproteinre, majd CyTOF-fel elemzik, amely több mint 50 paraméter egyidejű mérését teszi lehetővé.