Улучшение диагностики общего вариабельного иммунодефицита

Повышенная восприимчивость к бактериальным и вирусным инфекциям является отличительной чертой первичных иммунодефицитов (ПИД). Наиболее распространенными ПИД, требующими лечения с заменой Ig (SCIg или IVIg), являются общий вариабельный иммунодефицит (ОВИД), который диагностируется по наличию гипогаммаглобулинемии плюс дефектный ответ на вакцинные антигены. До постановки диагноза у пациентов с ОВИН часто развивается аутоиммунитет, требующий иммуносупрессии, или рак, требующий химиотерапии. К сожалению, возникают трудности в постановке диагноза ОВИН у взрослых, получающих иммуносупрессивные препараты, стероиды или химиотерапию, что препятствует своевременному назначению заместительной терапии Ig у этих пациентов. Кроме того, ОВИН трудно диагностировать у детей раннего возраста. Секвенирование экзома и другие генетические методы до сих пор не смогли идентифицировать четкие моногенные причины ОВИН. В то же время у пациентов с нарушениями сигнальных путей, включая STAT1, STAT3, NFKB, PI3K и др., наблюдается клинический дефицит антител, что позволяет предположить, что при исследовании сигнальных путей исследователи могли обнаружить признаки ОВИН. Исследователи предлагают использовать новый широкий экран для изучения функциональных дефектов иммунных реакций человека при ОВИН. Используя времяпролетную масс-цитометрию (CyTOF) и фосфоспецифические антитела, исследователи одновременно изучат основные сигнальные пути всех циркулирующих типов врожденных и адаптивных иммунных клеток, чтобы выявить аномальное фосфорилирование сигнальных молекул в ответ на различные Канонические стимулы. Этот метод является инновационным, поскольку он идентифицирует дефекты передачи сигналов в иммунном ответе, будучи нечувствительным к химиотерапии или иммуносупрессии, поскольку исследуемые реакции передачи сигналов биологически предшествуют мишеням с подавленным иммунитетом. Наш подход создает новый «сигнальный отпечаток пальца» для облегчения диагностики ОВИН. Наше предложение также важно, потому что полученные знания о функциональных дефектах при ОВИН в сочетании с полноэкзомным секвенированием улучшат общее понимание иммунного ответа человека на инфекции.

Есть две основные цели: 1) изучение здоровых контрольных субъектов разного возраста в сравнении с пациентами с ОВИН и, кроме того, получение новой информации о том, как иммунные сигнальные реакции меняются с возрастом, что в настоящее время неизвестно; и 2) изучение пациентов с ОВИН для определить последовательные аберрантные сигнальные ответы, которые позволят ускорить диагностику и лечение.

Дизайн исследования: Исследователи предлагают обсервационное исследование случай-контроль с однократным забором крови среди двух когорт, пациентов с дефицитом антител (CVID) и здоровых людей. Методы. Пятьдесят (50) пациентов с ОВИН (взрослых и детей) получат согласие в Иммунологической клинике Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе. В то же время будут вестись поиски здоровых, подходящих по возрасту и полу контролей (100). В Калифорнийском университете в Лос-Анджелесе будет проведен один забор < 5 мл крови для немедленного анализа с помощью фосфо-CyTOF. Геномная ДНК будет получена из проанализированных образцов и последовательностей.

Этот скрининг исследует фосфорилирование всех циркулирующих типов иммунных клеток одновременно (CD4 и CD8 Т-клетки, В-клетки, NK-клетки, моноциты, макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы и ДК). Цельную кровь субъектов и контролей делят на аликвоты, и каждую порцию стимулируют либо цитокинами, агонистами TLR, антителами против TCR или анти-BCR, PMA, либо оставляют нестимулированной. Обработанные клетки будут окрашены на поверхности, зафиксированы, пермеабилизированы и окрашены внутриклеточно на 12 сигнальных фосфобелков, а затем проанализированы с помощью CyTOF, что позволяет одновременно измерять более 50 параметров.