Mejorando el diagnóstico de la inmunodeficiencia común variable

Una mayor susceptibilidad a las infecciones bacterianas y virales es el sello distintivo de las inmunodeficiencias primarias (PID). La IDP más común que requiere tratamiento con reemplazo de Ig (SCIg o IVIg) es la inmunodeficiencia variable común (CVID), que se diagnostica por la presencia de hipogammaglobulinemia más respuestas defectuosas a los antígenos de la vacuna. Antes del diagnóstico, los pacientes con CVID a menudo desarrollan autoinmunidad que requiere inmunosupresión o cánceres que requieren quimioterapia. Desafortunadamente, surgen dificultades para realizar el diagnóstico de IDCV en adultos tratados con medicamentos inmunosupresores, esteroides o quimioterapia, lo que impide el uso oportuno de terapias de reemplazo de Ig en estos pacientes. Además, CVID es difícil de diagnosticar en niños pequeños. La secuenciación del exoma y otros métodos genéticos hasta ahora no han logrado identificar causas monogénicas claras para CVID. Al mismo tiempo, los pacientes con trastornos de las vías de señalización, incluidos STAT1, STAT3, NFKB, PI3K y otros, tienen una deficiencia clínica de anticuerpos, lo que sugiere que al examinar las vías de señalización, los investigadores podrían encontrar signos de CVID. Los investigadores proponen utilizar una pantalla nueva y amplia para estudiar los defectos funcionales de las respuestas inmunitarias humanas en CVID. Usando citometría de masas de tiempo de vuelo (CyTOF) y anticuerpos fosfoespecíficos, los investigadores examinarán simultáneamente las principales vías de señalización de todos los tipos de células inmunitarias innatas y adaptativas circulantes a la vez para identificar la fosforilación anormal de moléculas de señalización en respuesta a una variedad de estímulos canónicos. Este método es innovador porque identifica defectos de señalización en la respuesta inmunitaria mientras es insensible a la quimioterapia o la inmunosupresión, porque las respuestas de señalización examinadas son biológicamente anteriores a los objetivos inmunosuprimidos. Nuestro enfoque genera una nueva "huella dactilar de señalización" para facilitar el diagnóstico de CVID. Nuestra propuesta también es impactante, porque el conocimiento adquirido sobre los defectos funcionales en CVID, cuando se combina con la secuenciación del exoma completo, mejorará la comprensión general de la respuesta inmune humana a las infecciones.

Hay dos objetivos principales: 1) estudiar sujetos de control sanos en una variedad de edades en comparación con pacientes con CVID y, además, generar nueva información sobre cómo las respuestas de señalización inmunitarias cambian con la edad, que actualmente se desconoce; y 2) estudiar pacientes con CVID para identificar las respuestas de señalización aberrantes consistentes que permitirán la aceleración del diagnóstico y el tratamiento.

Diseño del estudio: los investigadores proponen un estudio observacional de casos y controles con una sola extracción de sangre entre dos cohortes, pacientes con deficiencia de anticuerpos (CVID) y controles sanos. Métodos: Cincuenta (50) pacientes con CVID (adultos y niños) serán consentidos en la Clínica de Inmunología de UCLA. Al mismo tiempo, se buscarán controles sanos de la misma edad y género (100). Habrá una extracción de sangre de < 5 ml de sangre para ser analizada inmediatamente por fosfo-CyTOF en UCLA. El ADN genómico se preparará a partir de muestras y secuencias analizadas.

Esta pantalla examina la fosforilación de todos los tipos de células inmunitarias circulantes a la vez (células T CD4 y CD8, células B, células NK, monocitos, macrófagos, neutrófilos, eosinófilos y DC). La sangre completa de los sujetos y de los controles se dividirá en alícuotas en porciones, y cada porción se estimulará con citocinas, agonistas de TLR, anticuerpos anti-TCR o anti-BCR, PMA o se dejará sin estimular. Las células tratadas serán teñidas en la superficie, fijadas, permeabilizadas y teñidas intracelularmente para 12 fosfoproteínas de señalización, luego analizadas por CyTOF, que permite la medición de más de 50 parámetros simultáneamente.