胰腺癌个体化精准诊治 (PPDTPC)

肿瘤细胞从原发肿瘤和/或转移部位释放到血液中。 循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTC)作为液体活检的一部分，作为一种新的癌症诊断方法。 许多研究表明，CTC 计数与乳腺癌、结肠癌、肺癌或前列腺癌的发展相关。 当单个细胞或癌细胞簇获得从原发肿瘤分离和移动的能力，迁移通过周围组织，并进入淋巴系统和/或血液循环时，给定肿瘤的转移特征变得明显 [1-3 ]. 逃离原发性微环境的肿瘤细胞需要避免失巢凋亡，并且可能受到宿主免疫防御的挑战。 最后，CTC就像一颗种子，会转移到其他器官，促进转移和复发。 这些 CTC 可以通过利用其物理和生物学特性的不同技术进行富集和检测。 本研究通过检查 CTC（术前\术后\治疗前\治疗期间）的 iset 平台收集 CTC，并观察 CTC 计数与 PC 发展之间的关联 [4]。

患者来源的异种移植物 (PDX) 被证明能够始终如一地保留肿瘤形态和遗传表型。 与传统细胞系异种移植模型和基因工程小鼠模型不同，胰腺癌标本被移植到免疫缺陷小鼠体内。 最重要的是，PDX可以保留个体个体特殊的功能基因结构和生物标志物，更贴近个体的临床生物学特征，为药物筛选和疗效观察提供更好的预测效果。

一些研究发现，对比药物敏感性试验与临床药物反应的有效性 >90% [5]。 现在，我们构建PC的PDX，通过第二个基因序列或RNA序列检查遗传信息。 如果PDX有与原发肿瘤相似的遗传信息，我们会做药敏试验。 PC PDX 模型，我们已经证明早期 PDX 在形态上与原始癌症相似，并保留了肿瘤的患者间和患者内异质性，可以为 PC 的个性化治疗提供参考模型。

最重要的是，PDX 最明显的优势是与原发肿瘤的相似性，因此我们可以检查相同药物的敏感性。 但建立PDX大约需要3-4个月（包括建立模型和药敏试验）。 因此，我们需要将临床精准治疗方案应用于晚期胰腺癌患者。 Miniature Patient Derived Xenograft (Mini-PDX)，来自上海LIDE（lide）Biotech CO（公司），使用LIDE Biotech的OncoVeeTM-Mini PDX产品进行，并按照制造商的说明进行。 收获肿瘤样品，并在生物安全柜中用HBSS(Hank氏平衡盐溶液)洗涤以去除非肿瘤组织和坏死的肿瘤组织。 将肿瘤标本切成小块后，用胶原酶溶液37℃孵育1-2小时。 然后我们收集细胞，然后去除血细胞和成纤维细胞，并将细胞悬浮液转移到 HBSS 洗涤过的胶囊中。 对于皮下 (s.c.) 植入，做一个小的皮肤切口并将胶囊插入皮下组织。 一般每只小鼠服用4粒胶囊，给药7天。 通过 CTG（细胞活力）测定评估抗肿瘤活性。

受辐射的成纤维细胞饲养细胞和 Rho 激酶抑制剂 Y-27632 的组合有条件地诱导原代哺乳动物上皮细胞的无限增殖状态。 这些条件性重新编程的细胞 (CRC) 是核型稳定的和非致瘤性的。 因为自我更新是干细胞公认的特性，我们研究了 Y-27632 和饲养细胞是否诱导干细胞样表型。 我们发现 CRC 具有成体干细胞的共同特征，并表现出 α6 和 β1 整合素、ΔNp63α、CD44 和端粒酶逆转录酶的上调表达，以及 Notch 信号传导减少和核 β-连环蛋白水平升高。 CRC 的诱导是快速的（在 2 天内发生）并且是由整个细胞群的重新编程而不是选择一个次要亚群引起的。 CRC 不会过度表达胚胎或诱导多能干细胞特有的转录因子集（例如 Sox2、Oct4、Nanog 或 Klf4）。 CRC 的诱导也是可逆的，去除 Y-27632 和饲养层允许细胞正常分化。 CRC 被称为新闻人类精确协议。 在胰腺癌精准研究中，无法手术或获得少量组织的发展患者无法构建PDX，失去了PDX治疗的机会。 因此，我们利用CRCs平台在体外培养肿瘤干细胞，当细胞数量充足时，我们可以进行Mini-PDX或PDX药物检测[6]。

综上所述，由于目前不同阶段的PC患者在临床治疗中无法获得精准的个性化治疗，本研究通过CTC\PDX\Mini-PDX\CRs\RNA-SEQ\NGS（Next generation sequencing）平台有望提供精准诊断以及针对不同阶段PC患者的治疗。 同时，建立肿瘤信息生物样本库，为肿瘤学基础研究和转化医学研究提供理想的研究资料和平台。