Diagnostic de précision personnalisé et traitement du cancer du pancréas (PPDTPC)

Les cellules tumorales sont libérées de la tumeur primaire et/ou des sites métastatiques dans le sang. Les cellules tumorales circulantes (CTC), dans le cadre de la biopsie liquide, constituent une nouvelle méthode de diagnostic du cancer. De nombreuses études ont indiqué que le nombre de CTC avait une corrélation avec le développement du cancer du sein, du côlon, du poumon ou de la prostate. Lorsque des cellules individuelles ou des groupes de cellules cancéreuses acquièrent la capacité de se séparer et de s'éloigner de la tumeur primaire, migrent à travers les tissus environnants et pénètrent dans le système lymphatique et/ou la circulation sanguine, le trait métastatique de la tumeur donnée devient évident [1-3 ]. Les cellules tumorales qui s'échappent de leur microenvironnement primaire doivent éviter les anoïkis et peuvent être mises à l'épreuve par la défense immunologique de l'hôte. Enfin, le CTC est comme une graine qui se transfère à d'autres organes, contribuant à la métastase et à la récidive. Ces CTC pourraient être enrichis et détectés via différentes technologies qui tirent parti de leurs propriétés physiques et biologiques. Cette étude a collecté les CTC par plate-forme iset qui vérifie les CTC (préopératoire\postopératoire\prétraitement\pendant le traitement) et a observé l'association entre le nombre de CTC et le développement du PC [4].

Il a été démontré que la xénogreffe dérivée du patient (PDX) conservait systématiquement la morphologie tumorale et le phénotype génétique. Différent du modèle traditionnel de xénotransplantation de lignée cellulaire et du modèle de souris génétiquement modifiée, des échantillons d'adénocarcinome pancréatique ont été greffés à des souris immunodéficientes. Surtout, PDX pourrait conserver une structure génétique fonctionnelle spéciale et des biomarqueurs dans un cas personnel, plus proche des caractéristiques biologiques cliniques individuelles et fournir un meilleur effet de prédiction pour le dépistage des médicaments et l'observation de l'efficacité du traitement.

Comme certaines recherches l'ont découvert, l'efficacité du test de sensibilité aux médicaments contrastant avec la réponse clinique aux médicaments est> 90% [5]. Maintenant, nous construisons le PDX de PC, en vérifiant les informations génétiques par la deuxième séquence génétique ou séquence d'ARN. Si PDX a des informations génétiques similaires à la tumeur primaire, nous ferons un test de sensibilité aux médicaments. Le modèle PC PDX, dans lequel nous avons démontré que le PDX précoce était morphologiquement similaire au cancer d'origine et conservait l'hétérogénéité inter-patient et intra-patient de la tumeur, pourrait fournir un modèle de référence pour le traitement personnalisé du PC.

Surtout, l'avantage le plus évident du PDX est la similitude avec la tumeur primaire, nous avons donc pu vérifier la sensibilité du même médicament. Mais la construction de PDX prendra environ 3 à 4 mois (y compris la construction du modèle et le test de sensibilité aux médicaments). En conséquence, nous avons besoin d'un plan thérapeutique de précision clinique s'appliquant aux patients atteints d'un cancer du pancréas développé. Une xénogreffe miniature dérivée d'un patient (Mini-PDX), de Shanghai LIDE (lide) Biotech CO (société), a été réalisée avec le produit OncoVeeTM-Mini PDX de LIDE Biotech et a suivi les instructions du fabricant. Des échantillons de tumeurs ont été récoltés et lavés avec du HBSS (solution saline équilibrée de Hank) pour éliminer les tissus non tumoraux et les tissus tumoraux nécrotiques dans l'enceinte de sécurité biologique. Une fois les échantillons de tumeur coupés en petits fragments, ils ont été incubés avec une solution de collagénase à 37℃ pendant 1 à 2 heures. Ensuite, nous avons collecté les cellules, puis retiré les cellules sanguines et les fibroblastes et la suspension cellulaire a été transférée dans les capsules lavées au HBSS. Pour l'implantation sous-cutanée (s.c.), une petite incision cutanée a été pratiquée et la capsule a été insérée à travers le tissu sous-cutané. Généralement, chaque souris a reçu 4 capsules et l'administration du médicament a été effectuée pendant 7 jours. L'activité anti-tumorale a été évaluée par le test CTG (viabilité cellulaire).

La combinaison de cellules nourricières de fibroblastes irradiées et d'un inhibiteur de Rho kinase, Y-27632, induit conditionnellement un état prolifératif indéfini dans les cellules épithéliales primaires de mammifères. Ces cellules conditionnellement reprogrammées (CRC) étaient stables au caryotype et non tumorigènes. Parce que l'auto-renouvellement était une propriété reconnue des cellules souches, nous avons cherché à savoir si Y-27632 et les cellules nourricières induisaient un phénotype de type tige. Nous avons constaté que les CRC partageaient les caractéristiques des cellules souches adultes et présentaient une expression régulée à la hausse des intégrines α6 et β1, ΔNp63α, CD44 et de la transcriptase inverse de la télomérase, ainsi qu'une diminution de la signalisation Notch et une augmentation du niveau de β-caténine nucléaire. L'induction des CRC a été rapide (se produit dans les 2 jours) et résulte de la reprogrammation de l'ensemble de la population cellulaire plutôt que de la sélection d'une sous-population mineure. Les CRC ne surexpriment pas les ensembles de facteurs de transcription caractéristiques des cellules souches pluripotentes embryonnaires ou induites (par exemple, Sox2, Oct4, Nanog ou Klf4). L'induction des CRC était également réversible, et l'élimination du Y-27632 et des nourrisseurs a permis aux cellules de se différencier normalement. Les CRC ont été appelés sur le nouveau protocole de précision humaine. Dans l'étude de précision sur le cancer du pancréas, les patients inopérables ou développés qui ont acquis un peu de tissu ne pouvaient pas construire de PDX et perdaient la chance d'un traitement par PDX. Par conséquent, nous avons utilisé la plate-forme CRC pour cultiver des cellules souches tumorales in vitro, lorsque nous disposions de cellules adéquates, nous pouvions effectuer un dosage de médicaments Mini-PDX ou PDX [6].

En résumé, comme les différents stades des patients PC ne pouvaient pas acquérir une précision personnalisée dans le traitement clinique à l'heure actuelle, cette étude par les plateformes CTC\PDX\Mini-PDX\CRs\RNA-SEQ\NGS (séquençage de nouvelle génération) devait fournir un diagnostic de précision et le traitement des différents stades des patients PC. Pendant ce temps, nous avons pu créer une biobanque d'informations sur les tumeurs, qui a fourni des matériaux de recherche et des plates-formes idéales pour la recherche fondamentale en oncologie et la recherche en médecine translationnelle.