Персонализированная прецизионная диагностика и лечение рака поджелудочной железы (PPDTPC)

Опухолевые клетки выделяются из первичной опухоли и/или мест метастазирования в кровь. Циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) в составе жидкой биопсии выступают в качестве нового метода диагностики рака. Многие исследования показали, что количество ЦОК коррелирует с развитием рака молочной железы, толстой кишки, легких или предстательной железы. Когда отдельные клетки или скопления раковых клеток приобретают способность отделяться и удаляться от первичной опухоли, мигрировать через окружающие ткани и попадать в лимфатическую систему и/или кровообращение, метастатический признак данной опухоли становится очевидным [1-3]. ]. Опухолевые клетки, которые покидают свое первичное микроокружение, должны избегать аноикиса и могут быть атакованы иммунологической защитой хозяина. Наконец, ЦОК подобны семенам, которые переносятся в другие органы, способствуя метастазированию и рецидивам. Эти ЦОК могут быть обогащены и обнаружены с помощью различных технологий, использующих преимущества их физических и биологических свойств. В этом исследовании ЦОК собирались с помощью платформы iset, которая проверяет ЦОК (до операции, после операции, до лечения и во время лечения) и наблюдала связь между количеством ЦОК и развитием ПК [4].

Было продемонстрировано, что ксенотрансплантат, полученный от пациента (PDX), неизменно сохраняет морфологию опухоли и генетический фенотип. В отличие от традиционной модели ксенотрансплантации клеточной линии и модели генетически модифицированных мышей, образцы аденокарциномы поджелудочной железы были привиты мышам с иммунодефицитом. Прежде всего, PDX может сохранять особую функциональную структуру генов и биомаркеры в индивидуальном случае, ближе к индивидуальным клинико-биологическим характеристикам и обеспечивая лучший прогностический эффект для скрининга лекарств и наблюдения за эффективностью лечения.

Как показали некоторые исследования, эффективность контрастирования теста на лекарственную чувствительность с клиническим ответом на лекарство составляет >90% [5]. Теперь строим PDX ПК, проверяя генетическую информацию по второй генетической последовательности или последовательности РНК. Если PDX имеет аналогичную генетическую информацию первичной опухоли, мы проведем тест на чувствительность к препарату. Модель PC PDX, с помощью которой мы продемонстрировали, что ранний PDX был морфологически подобен исходному раку и сохранял гетерогенность опухоли как между пациентами, так и внутри пациентов, может предоставить эталонную модель для персонализированного лечения PC.

Прежде всего, наиболее очевидным преимуществом PDX является сходство с первичной опухолью, поэтому мы могли проверить чувствительность того же препарата. Но создание PDX займет около 3-4 месяцев (включая создание модели и тест на чувствительность к лекарствам). В связи с этим необходим клинический прецизионный терапевтический план для пациентов с развившимся раком поджелудочной железы. Миниатюрный ксенотрансплантат, полученный от пациента (Mini-PDX) от Shanghai LIDE(lide) Biotech CO(company), был проведен с использованием продукта OncoVeeTM-Mini PDX от LIDE Biotech в соответствии с инструкциями производителя. Образцы опухолей собирали и промывали HBSS (сбалансированный солевой раствор Хэнка) для удаления неопухолевой ткани и некротической опухолевой ткани в боксе биологической безопасности. После разрезания образцов опухоли на мелкие фрагменты их инкубировали с раствором коллагеназы при 37℃ в течение 1-2 часов. Затем мы собирали клетки с последующим удалением клеток крови и клеток фибробластов, а клеточную суспензию переносили в капсулы, промытые HBSS. Для подкожной (пк) имплантации делали небольшой разрез кожи и капсулу вставляли через подкожную клетчатку. Как правило, каждая мышь получала по 4 капсулы и введение препарата осуществляли в течение 7 дней. Противоопухолевую активность оценивали с помощью анализа CTG (жизнеспособности клеток).

Комбинация облученных питающих клеток фибробластов и ингибитора Rho-киназы, Y-27632, условно индуцировала неопределенное пролиферативное состояние в первичных эпителиальных клетках млекопитающих. Эти условно перепрограммированные клетки (CRC) были стабильны по кариотипу и не канцерогенны. Поскольку самообновление было признанным свойством стволовых клеток, мы исследовали, индуцируют ли Y-27632 и фидерные клетки стволоподобный фенотип. Мы обнаружили, что CRC имеют общие характеристики взрослых стволовых клеток и демонстрируют повышенную экспрессию интегринов α6 и β1, ΔNp63α, CD44 и теломеразной обратной транскриптазы, а также снижение передачи сигналов Notch и повышенный уровень ядерного β-катенина. Индукция CRC была быстрой (происходит в течение 2 дней) и являлась результатом перепрограммирования всей клеточной популяции, а не выбора минорной субпопуляции. CRC не сверхэкспрессировали наборы факторов транскрипции, характерные для эмбриональных или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (например, Sox2, Oct4, Nanog или Klf4). Индукция CRC также была обратимой, и удаление Y-27632 и фидеров позволяло клеткам нормально дифференцироваться. CRCs был назван протоколом новостей о человеческой точности. В прецизионном исследовании рака поджелудочной железы пациенты с неоперабельным или развившимся раком, которые приобрели небольшое количество ткани, не могли построить PDX и потеряли шанс на лечение PDX. Следовательно, мы использовали платформу CRCs для выращивания опухолевых стволовых клеток in vitro, когда у нас было достаточно клеток, мы могли провести анализ лекарств Mini-PDX или PDX [6].

Таким образом, поскольку в настоящее время пациенты с РПЖ на разных стадиях не могут получить точную персонализацию в клиническом лечении, было предсказано, что это исследование с использованием платформ CTC\PDX\Mini-PDX\CRs\RNA-SEQ\NGS (секвенирование следующего поколения) обеспечит точную диагностику. и лечение пациентов с РПЖ на разных стадиях. Между тем, мы могли бы создать биобанк информации об опухолях, который предоставил бы идеальные исследовательские материалы и платформы для фундаментальных исследований в области онкологии и исследований в области трансляционной медицины.