Diagnóstico e Tratamento de Precisão Personalizada do Câncer de Pâncreas (PPDTPC)

As células tumorais são liberadas do tumor primário e/ou locais metastáticos para o sangue. As células tumorais circulantes (CTC), como parte da biópsia líquida, são um novo método para diagnosticar o câncer. Muitos estudos indicaram que as contagens de CTC tinham uma correlação com o desenvolvimento de câncer de mama, cólon, pulmão ou próstata. Quando células individuais ou grupos de células cancerígenas adquirem a capacidade de se separar e se afastar do tumor primário, migrar através do tecido circundante e entrar no sistema linfático e/ou na circulação sanguínea, o traço metastático do tumor em questão torna-se óbvio [1-3 ]. As células tumorais que escapam de seu microambiente primário precisam evitar anoikis e podem ser desafiadas pela defesa imunológica do hospedeiro. Por fim, a CTC é como uma semente que se transfere para outros órgãos, contribuindo para metástases e recidivas. Essas CTC podem ser enriquecidas e detectadas por meio de diferentes tecnologias que tiram proveito de suas propriedades físicas e biológicas. Este estudo coletou CTC pela plataforma iset que verifica CTC (pré-operatório\pós-operatório\pré-tratamento\durante o tratamento) e observou a associação entre as contagens de CTC e o desenvolvimento de PC [4].

Foi demonstrado que o xenoenxerto derivado do paciente (PDX) reteve consistentemente a morfologia do tumor e o fenótipo genético. Diferente do modelo tradicional de xenotransplante de linha celular e do modelo de camundongo geneticamente modificado, os espécimes de adenocarcinoma pancreático foram enxertados em camundongos imunodeficientes. Acima de tudo, o PDX pode manter a estrutura genética funcional especial e os biomarcadores no caso pessoal, mais próximos das características biológicas clínicas individuais e proporcionando um melhor efeito de previsão para triagem de drogas e observação da eficiência do tratamento.

Como algumas pesquisas descobriram, a eficácia do teste de sensibilidade a medicamentos contrastantes com a resposta clínica a medicamentos é > 90% [5]. Agora, construímos o PDX do PC, verificando a informação genética pela segunda sequência genética ou sequência de RNA. Se o PDX tiver informações genéticas semelhantes ao tumor primário, faremos um teste de sensibilidade a drogas. O modelo PC PDX, pelo qual demonstramos que o PDX inicial era morfologicamente semelhante ao câncer original e reteve a heterogeneidade interpaciente e intrapaciente do tumor, pode fornecer um modelo de referência para o tratamento personalizado do PC.

Acima de tudo, a vantagem mais óbvia do PDX é a semelhança com o tumor primário, para que possamos verificar a sensibilidade do mesmo medicamento. Mas a construção do PDX levará cerca de 3 a 4 meses (incluindo a construção do modelo e o teste de sensibilidade ao medicamento). Como resultado, precisamos de um plano terapêutico de precisão clínica aplicado aos pacientes com câncer pancreático desenvolvido. O xenoenxerto derivado do paciente em miniatura (Mini-PDX), da Shanghai LIDE (lide) Biotech CO (empresa), foi realizado com o produto OncoVeeTM-Mini PDX da LIDE Biotech e seguiu as instruções do fabricante. As amostras de tumor foram colhidas e lavadas com HBSS (solução salina balanceada de Hank) para remover tecido não tumoral e tecido tumoral necrótico no gabinete de biossegurança. Depois que as amostras do tumor foram cortadas em pequenos fragmentos, elas foram incubadas com solução de colagenase a 37 ℃ por 1-2 horas. Em seguida, coletamos as células seguidas da remoção das células sanguíneas e das células fibroblásticas e a suspensão celular foi transferida para as cápsulas lavadas de HBSS. Para implantação subcutânea (s.c.), foi feita uma pequena incisão na pele e a cápsula foi inserida através do tecido subcutâneo. Geralmente, cada camundongo recebeu 4 cápsulas e a administração da droga foi realizada por 7 dias. A atividade antitumoral foi avaliada através do ensaio CTG (cell viabilidade).

A combinação de células alimentadoras de fibroblastos irradiadas e inibidor de Rho quinase, Y-27632, induziu condicionalmente um estado proliferativo indefinido em células epiteliais primárias de mamíferos. Essas células condicionalmente reprogramadas (CRCs) eram cariotipicamente estáveis ​​e não tumorigênicas. Como a autorrenovação era uma propriedade reconhecida das células-tronco, investigamos se o Y-27632 e as células alimentadoras induziam um fenótipo semelhante ao tronco. Descobrimos que CRCs compartilhavam características de células-tronco adultas e exibiam expressão aumentada de integrinas α6 e β1, ΔNp63α, CD44 e transcriptase reversa da telomerase, bem como diminuição da sinalização Notch e aumento do nível de β-catenina nuclear. A indução de CRCs foi rápida (ocorre em 2 dias) e resultou da reprogramação de toda a população celular, em vez da seleção de uma subpopulação menor. Os CRCs não superexpressaram os conjuntos de fatores de transcrição característicos de células-tronco pluripotentes embrionárias ou induzidas (por exemplo, Sox2, Oct4, Nanog ou Klf4). A indução de CRCs também foi reversível, e a remoção de Y-27632 e alimentadores permitiu que as células se diferenciassem normalmente. CRCs foi chamado no protocolo de precisão humana de notícias. No estudo de precisão do câncer pancreático, os pacientes com câncer inoperável ou desenvolvido que adquiriram um pouco de tecido não conseguiram construir PDX e perderam a chance de tratamento com PDX. Portanto, usamos a plataforma CRCs para cultivar células-tronco tumorais in vitro, quando temos células adequadas, podemos fazer o ensaio de drogas Mini-PDX ou PDX [6].

Em resumo, como os diferentes estágios de pacientes com PC não podem adquirir precisão personalizada no tratamento clínico no momento, este estudo das plataformas CTC\PDX\Mini-PDX\CRs\RNA-SEQ\NGS (sequenciamento de próxima geração) foi previsto para fornecer diagnóstico preciso e tratamento para diferentes estágios de pacientes com CP. Enquanto isso, poderíamos construir um biobanco de informações sobre tumores, que fornecesse materiais de pesquisa e plataformas ideais para pesquisa básica em oncologia e pesquisa em medicina translacional.