Gepersonaliseerde precisiediagnose en behandeling van pancreaskanker (PPDTPC)

Tumorcellen worden vanuit de primaire tumor en/of metastatische plaatsen in het bloed afgegeven. Circulerende tumorcellen (CTC), als onderdeel van vloeibare biopsie, wordt gebruikt als een nieuwe methode om kanker te diagnosticeren. Veel studies gaven aan dat CTC-tellingen een correlatie hadden met de ontwikkeling van borst-, colon-, long- of prostaatkanker. Wanneer individuele cellen of clusters van kankercellen het vermogen krijgen om zich te scheiden en weg te bewegen van de primaire tumor, door het omringende weefsel te migreren en het lymfestelsel en/of de bloedsomloop binnen te gaan, wordt de metastatische eigenschap van de gegeven tumor duidelijk [1-3 ]. Tumorcellen die uit hun primaire micro-omgeving ontsnappen, moeten anoiki's vermijden en kunnen worden uitgedaagd door de immunologische afweer van de gastheer. Ten slotte is CTC als een zaadje dat wordt overgedragen naar andere organen, wat bijdraagt ​​aan metastase en herhaling. Deze CTC's kunnen worden verrijkt en gedetecteerd via verschillende technologieën die profiteren van hun fysische en biologische eigenschappen. Deze studie verzamelde CTC per iset-platform dat CTC controleert (pre-operatief\postoperatief\voorbehandeling\tijdens de behandeling) en observeerde het verband tussen CTC-tellingen en pc-ontwikkeling [4].

Van patiënt-afgeleid xenotransplantaat (PDX) werd aangetoond dat het consistent de tumormorfologie en het genetische fenotype behield. Anders dan het traditionele cellijn-xenotransplantatiemodel en het genetisch gemanipuleerde muismodel, werden adenocarcinoomspecimens van de pancreas geënt op immunodeficiënte muizen. Bovenal zou PDX de speciale functionele genstructuur en biomarkers in persoonlijk geval kunnen behouden, dichter bij de individuele klinische biologische kenmerken en een beter voorspellend effect kunnen bieden voor het screenen van geneesmiddelen en observatie voor behandelingsefficiëntie.

Zoals sommige onderzoeken hebben ontdekt, is het effect van het contrasteren van de gevoeligheidstest voor geneesmiddelen met de klinische respons op geneesmiddelen> 90% [5]. Nu bouwen we de PDX van pc, waarbij we de genetische informatie controleren aan de hand van de tweede genetische sequentie of RNA-sequentie. Als PDX vergelijkbare genetische informatie heeft als de primaire tumor, zullen we een gevoeligheidstest voor geneesmiddelen uitvoeren. PC PDX-model, waarbij we hebben aangetoond dat de vroege PDX morfologisch vergelijkbaar was met de oorspronkelijke kanker en zowel inter-patiënt- als intra-patiënt-heterogeniteit van de tumor behield, zou een referentiemodel kunnen zijn voor gepersonaliseerde behandeling van pc.

Bovenal is het meest voor de hand liggende voordeel van PDX de gelijkenis met een primaire tumor, dus we konden de gevoeligheid van hetzelfde medicijn controleren. Maar het bouwen van PDX duurt ongeveer 3-4 maanden (inclusief het bouwen van het model en de gevoeligheidstest voor medicijnen). Dientengevolge hebben we een klinisch nauwkeurig therapeutisch plan nodig dat van toepassing is op de ontwikkelde alvleesklierkankerpatiënten. Miniature Patient Derived Xenograft (Mini-PDX), van Shanghai LIDE(lide) Biotech CO(company), werd uitgevoerd met het OncoVeeTM-Mini PDX-product van LIDE Biotech en volgde de instructies van de fabrikant op. Tumormonsters werden geoogst en gewassen met HBSS (Hank's gebalanceerde zoutoplossing) om niet-tumorweefsel en necrotisch tumorweefsel in een bioveiligheidskast te verwijderen. Nadat de tumormonsters in kleine fragmenten waren gesneden, werden ze 1-2 uur bij 37°C geïncubeerd met collagenase-oplossing. Daarna verzamelden we de cellen gevolgd door het verwijderen van de bloedcellen en fibroblastcellen en de celsuspensie werd overgebracht naar de met HBSS gewassen capsules. Voor subcutane (s.c.) implantatie werd een kleine incisie in de huid gemaakt en werd de capsule door het onderhuidse weefsel ingebracht. Over het algemeen ontving elke muis 4 capsules en de toediening van het geneesmiddel werd gedurende 7 dagen uitgevoerd. De antitumoractiviteit werd geëvalueerd door middel van de CTG-assay (cellevensvatbaarheid).

De combinatie van bestraalde fibroblast-feedercellen en Rho-kinaseremmer, Y-27632, induceerde voorwaardelijk een onbepaalde proliferatieve toestand in primaire epitheelcellen van zoogdieren. Deze conditioneel geherprogrammeerde cellen (CRC's) waren karyotype-stabiel en niet-tumorverwekkend. Omdat zelfvernieuwing een erkende eigenschap van stamcellen was, hebben we onderzocht of Y-27632 en feedercellen een stengelachtig fenotype induceerden. We ontdekten dat CRC's kenmerken van volwassen stamcellen deelden en opwaarts gereguleerde expressie van α6- en β1-integrines, ΔNp63α, CD44 en telomerase reverse transcriptase vertoonden, evenals verminderde Notch-signalering en een verhoogd niveau van nucleair β-catenine. De inductie van CRC's was snel (treedt op binnen 2 d) en was het resultaat van herprogrammering van de gehele celpopulatie in plaats van de selectie van een kleine subpopulatie. CRC's brachten de transcriptiefactorsets die kenmerkend zijn voor embryonale of geïnduceerde pluripotente stamcellen (bijv. Sox2, Oct4, Nanog of Klf4) niet tot overexpressie. De inductie van CRC's was ook omkeerbaar en door verwijdering van Y-27632 en feeders konden de cellen normaal differentiëren. CRC's werden gebeld op het nieuws-protocol voor menselijke precisie. In de precisiestudie naar alvleesklierkanker konden patiënten met inoperabele of ontwikkelde patiënten die een beetje weefsel hadden verworven geen PDX opbouwen en verloren ze de kans op PDX-behandeling. Daarom gebruikten we het CRC-platform om tumorstamcellen in vitro te laten groeien. Als we voldoende cellen hadden, konden we een Mini-PDX- of PDX-geneesmiddeltest uitvoeren[6].

Samenvattend, aangezien verschillende stadia van pc-patiënten momenteel geen precisie konden verwerven die gepersonaliseerd was in klinische behandeling, werd voorspeld dat deze studie door CTC\PDX\Mini-PDX\CRs\RNA-SEQ\NGS (Next generation sequencing)-platforms een nauwkeurige diagnose zou bieden. en behandeling voor verschillende stadia van pc-patiënten. Ondertussen konden we een biobank met tumorinformatie bouwen, die ideaal onderzoeksmateriaal en platforms bood voor oncologisch basisonderzoek en translationeel geneeskundig onderzoek.