Personalizovaná precizní diagnostika a léčba rakoviny slinivky břišní (PPDTPC)

Nádorové buňky jsou uvolňovány z primárního nádoru a/nebo metastatických míst do krve. Cirkulující nádorové buňky (CTC) jako součást tekuté biopsie slouží jako nová metoda diagnostiky rakoviny. Mnoho studií ukázalo, že počty CTC měly korelaci s rozvojem rakoviny prsu, tlustého střeva, plic nebo prostaty. Když jednotlivé buňky nebo shluky rakovinných buněk získají schopnost oddělit se a vzdálit se od primárního nádoru, migrovat okolní tkání a vstoupit do lymfatického systému a/nebo krevního oběhu, metastatický rys daného nádoru se stane zřejmým [1-3 ]. Nádorové buňky, které unikají ze svého primárního mikroprostředí, se musí vyhýbat anoikis a mohou být napadeny imunologickou obranou hostitele. Konečně, CTC je jako semeno, které se přenáší do jiných orgánů a přispívá k metastázám a recidivám. Tyto CTC by mohly být obohaceny a detekovány pomocí různých technologií, které využívají jejich fyzikálních a biologických vlastností. Tato studie shromažďovala CTC pomocí platformy Iset, která kontroluje CTC (předoperační\pooperační\před léčbou\během léčby) a sledovala souvislost mezi počtem CTC a vývojem PC [4].

Bylo prokázáno, že xenograft odvozený od pacienta (PDX) si konzistentně zachoval morfologii nádoru a genetický fenotyp. Na rozdíl od tradičního xenotransplantačního modelu buněčné linie a geneticky upraveného myšího modelu byly vzorky adenokarcinomu pankreatu naroubovány imunodeficientním myším. PDX by především mohl uchovávat speciální funkční genovou strukturu a biomarkery v osobním případě, blíže k individuálním klinickým biologickým charakteristikám a poskytovat lepší prediktivní účinek pro screening léků a pozorování účinnosti léčby.

Jak zjistili některé výzkumy, účinnost kontrastního testu citlivosti na léčivo s klinickou odpovědí na léčivo je >90 % [5]. Nyní sestavujeme PDX PC, kontrolujeme genetickou informaci pomocí druhé genetické sekvence nebo sekvence RNA. Pokud má PDX podobnou genetickou informaci jako primární nádor, provedeme test citlivosti na léky. Model PC PDX, kterým jsme prokázali, že časná PDX byla morfologicky podobná původní rakovině a zachovala si heterogenitu nádoru mezi pacienty i uvnitř pacienta, by mohl poskytnout referenční model pro personalizovanou léčbu PC.

Především nejzjevnější výhodou PDX je podobnost s primárním nádorem, takže jsme mohli zkontrolovat citlivost stejného léku. Ale sestavení PDX bude trvat asi 3-4 měsíce (včetně sestavení modelu a testu citlivosti na léky). V důsledku toho potřebujeme klinicky přesný terapeutický plán aplikovaný na pacienty s rozvinutou rakovinou slinivky břišní. Miniaturní xenograft odvozený od pacienta (Mini-PDX), od Shanghai LIDE (lide) Biotech CO (společnost), byl proveden s produktem OncoVeeTM-Mini PDX od LIDE Biotech a řídil se pokyny výrobce. Vzorky nádoru byly sklizeny a promyty HBSS (Hankův vyvážený solný roztok), aby se odstranila nenádorová tkáň a nekrotická nádorová tkáň v biologickém bezpečnostním boxu. Poté, co byly vzorky nádoru rozřezány na malé fragmenty, byly inkubovány s roztokem kolagenázy při 37 °C po dobu 1-2 hodin. Poté jsme odebrali buňky a následně jsme odstranili krvinky a fibroblastové buňky a buněčná suspenze se přenesla do HBSS promytých kapslí. Pro subkutánní (s.c.) implantaci byl proveden malý kožní řez a kapsle byla vložena přes podkožní tkáň. Obecně každá myš dostala 4 tobolky a podávání léčiva bylo prováděno po dobu 7 dnů. Protinádorová aktivita byla hodnocena pomocí testu CTG (životaschopnost buněk).

Kombinace ozářených fibroblastových podpůrných buněk a inhibitoru Rho kinázy, Y-27632, podmíněně indukovala neurčitý proliferativní stav v primárních savčích epiteliálních buňkách. Tyto podmíněně přeprogramované buňky (CRC) byly karyotypově stabilní a netumorogenní. Protože samoobnova byla uznávanou vlastností kmenových buněk, zkoumali jsme, zda Y-27632 a podpůrné buňky indukovaly fenotyp podobný kmenu. Zjistili jsme, že CRC sdílejí charakteristiky dospělých kmenových buněk a vykazují up-regulovanou expresi a6 a β1 integrinů, ANp63α, CD44 a telomerázovou reverzní transkriptázu, stejně jako sníženou signalizaci Notch a zvýšenou hladinu jaderného β-kateninu. Indukce CRC byla rychlá (vyskytuje se během 2 dnů) a byla výsledkem přeprogramování celé buněčné populace spíše než selekce menší subpopulace. CRC nadměrně neexprimovaly sady transkripčních faktorů charakteristické pro embryonální nebo indukované pluripotentní kmenové buňky (např. Sox2, Oct4, Nanog nebo Klf4). Indukce CRCs byla také reverzibilní a odstranění Y-27632 a živičů umožnilo buňkám normální diferenciaci. CRCs byl povolán do zpravodajského protokolu lidské přesnosti. Ve studii preciznosti rakoviny slinivky břišní pacienti s inoperabilními nebo rozvinutými, kteří získali malé množství tkáně, nemohli vybudovat PDX a ztratili šanci na léčbu PDX. Použili jsme tedy platformu CRCs k růstu nádorových kmenových buněk in vitro, když jsme měli adekvátní buňky, mohli jsme provést Mini-PDX nebo PDX lékový test[6].

Stručně řečeno, protože různá stádia pacientů s PC nemohla v současné době získat přesnost personalizovanou v klinické léčbě, tato studie na platformách CTC\PDX\Mini-PDX\CRs\RNA-SEQ\NGS (sekvenování nové generace) by měla poskytnout přesnou diagnózu. a léčba pro různá stadia pacientů s PC. Mezitím jsme mohli vybudovat nádorovou informační biobanku, která poskytla ideální výzkumné materiály a platformy pro základní onkologický výzkum a výzkum translační medicíny.