热消融治疗肝细胞癌中细胞因子的变化

背景 肝癌是世界上第六大常见恶性肿瘤。 它是癌症相关死亡的第四大原因，2018 年全球新发病例超过 84 万例。1 肝细胞癌 (HCC) 占原发性肝癌的 75% - 85%。 肝切除术、射频消融 (RFA) 和原位肝移植是早期 HCC 患者的主要治疗选择。2 肝切除术仅适用于早期 HCC 且肝功能保留的患者，而肝移植的应用在全球范围内受到限制，因为器官短缺。 因此，对于因肝硬化而导致肝功能处于临界状态的 HCC 患者，RFA 是最有效的治疗方法，尤其是在乙型肝炎感染流行的亚太地区。

热消融通过肿瘤蛋白的直接热变性和凝固来杀死肿瘤。3 失活和受损的肿瘤细胞在体内的滞留会刺激强烈的炎症反应。 另据报道，热消融为产生抗肿瘤免疫创造了肿瘤抗原来源，并增强了宿主免疫反应。 4 活化的血小板释放白细胞介素（IL）-1、肿瘤坏死因子（TNF）和转化生长因子，增加血管通透性并促进趋化性。 中性粒细胞被吸引到消融部位，并通过旨在破坏刺激剂的氧化爆发机制释放自由基来清除碎片。 随后巨噬细胞迁移，过渡到增殖阶段，在此期间巨噬细胞分泌生长因子，包括 TNF、血管内皮生长因子 (VEGF) 和碱性成纤维细胞生长因子 5。 巨噬细胞和淋巴细胞的增殖活性水平由 IL-6 正介导和 IL-10 负介导。6, 7 如果发生不完全消融或接近完全消融，亚致死消融区中的活肿瘤细胞可能会受到伴随的炎症反应（包括细胞因子和生长因子水平增加）的积极或消极影响。 消融后的炎症可能会通过巨噬细胞和淋巴细胞产生生长因子和细胞因子产生负面影响，从而刺激亚致死区内的肿瘤细胞生长。 8 使用组织免疫组织化学染色、组织裂解物酶联免疫吸附测定和血浆酶联免疫吸附测定进行的人类和动物研究表明，RFA 后特定炎症和免疫调节介质显着增加。9, 10 主要研究者之前曾报告过使用猪肝模型研究 RFA 的炎症反应，与肝切除术相比，RFA 后全身炎症标志物（TNF 和 IL-1）的水平显着升高。 11 尽管关于肝肿瘤热消融炎症反应的临床前研究是大量的，但这些微环境反应的临床相关性在文献中有限。 Erinjeri 等人 12 报道，消融类型和初步诊断预测了肿瘤热消融后 IL-6 的变化，患者年龄预测了 IL-10 的变化。 IL-6 可能作为免疫原性细胞死亡的替代物，免疫原性死亡诱导程序与免疫检查点抑制剂的组合可能有利于延长 RFA 后患者的生存期。13 在细胞水平上，RFA 已被证明可以增强肿瘤相关抗原特异性 T 细胞反应，这有助于 HCC 患者的无复发生存。 14 尽管如此，目前尚不清楚 RFA 诱导的细胞因子变化与其对肿瘤复发和患者长期生存的预后价值之间可能的关系。

主要研究者报告了 209 名接受 RFA 作为 HCC 唯一治疗方法的患者的结果。 15 中位随访时间为26个月，总体肿瘤复发率高达80%。 因此，使用替代生物标志物（例如， 细胞因子）对辅助治疗（例如，细胞因子）的使用具有重要的临床意义。 免疫检查点抑制剂）。

因此，研究者提出这项单中心前瞻性研究来分析接受RFA或MWA治疗的HCC患者血清细胞因子水平的变化。 结果将用于关联患者的临床结果，特别是肿瘤复发和长期生存结果。 这项拟议的临床试验对于确定免疫反应作为替代生物标志物预测长期患者预后的潜在作用具有重要的临床意义。 它为未来研究使用免疫检查点抑制剂对接受 RFA 或其他热消融疗法治疗的 HCC 患者进行辅助治疗奠定了平台。 研究中心是香港的一个三级转诊中心，治疗复杂的肝胆胰疾病患者。 研究中心每年新收治的HCC患者数量约为200例，每年接受肝切除术的HCC患者数量约为80例。 所有研究者都是在肝癌患者临床和基础研究方面拥有丰富经验的专家。 研究人员已开展多项关于 HCC 治疗和肝胆外科其他方面的随机试验，并在国际期刊上发表。 16-19

假设 RFA 或 MWA 治疗 HCC 可能会诱导炎症免疫反应，从而导致细胞因子水平发生变化。 这种微环境反应可能对残留的肿瘤细胞产生正向或负向调节，导致肿瘤复发和患者长期生存的显着变化。

研究目的本前瞻性研究旨在探讨肝癌RFA或MWA后细胞因子水平的变化及其与肿瘤复发和患者长期生存数据的临床相关性。 主要结果指标是 RFA 后一年内的早期肿瘤复发。 次要结果指标是其他肿瘤复发模式（晚期肝内复发和肝外转移）、总生存期和无复发生存期。

主要结局指标是 RFA 和 MWA 后一年内早期肝内肿瘤复发。 次要结果指标是其他肿瘤复发模式（晚期肝内复发和肝外转移）、总生存期和无复发生存期。

使用研究的患者血清样本分析细胞因子水平

可用分析物：

IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12 (p40)、IL-12 (p70)、TNF-α、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CCL2、CCL5

市售套件：

MILLIPLEX MAP 人细胞因子/趋化因子磁珠组 - 免疫学多重检测

套件应用：

使用 MILLIPLEX MAP 人细胞因子/趋化因子磁珠面板 - 免疫学多重检测同时分析人血清、血浆和细胞培养样品中的多种细胞因子和趋化因子生物标志物。 这是过夜孵育测定。

预计研究时间 研究者所在机构是香港主要的肝癌三级转诊中心。 一旦获得机构审查委员会的批准，将开始患者招募。 招聘周期约为12个月至18个月。 中位随访期约为18个月，预计研究总期限为三年。

样本量估算 根据该科室过往接受治疗的病人人数，预计预计招募的病人人数为60人。

统计分析 所有数据将由研究助理前瞻性地收集并在数据库中计算机化。 在适当的情况下，将通过卡方检验或费舍尔精确检验进行统计分析，以比较离散变量，并通过曼-惠特尼 U 检验来比较连续变量。 累积生存率将通过 Kaplan-Meier 方法计算并通过对数秩检验进行比较。 使用逻辑回归模型进行多变量分析，以确定影响早期肿瘤复发的独立预后因素。

伦理考虑本研究将根据世界医学协会赫尔辛基宣言和国际协调会议-良好临床实践进行。

同意书 在手术和随机分组前向患者充分解释试验后，将获得书面自愿同意。

与临床应用的相关性

该研究对 HCC 患者的手术治疗具有重要的临床影响。 由于乙型肝炎感染在香港等亚太地区仍然流行，乙型肝炎相关的肝癌仍然是整个癌症患者的负担。 本研究旨在确定免疫反应作为替代生物标志物预测长期患者预后的潜在作用。 它增强了未来研究使用免疫检查点抑制剂对接受热消融治疗的 HCC 患者进行辅助治疗的平台的开发。