Cambiamento delle citochine nel carcinoma epatocellulare trattato mediante ablazione termica

Background Il cancro al fegato è il sesto tumore maligno più comune al mondo. È la quarta causa principale di decessi correlati al cancro e ha un'incidenza globale di oltre 840.000 nuovi casi nel 2018.1 Il carcinoma epatocellulare (HCC) rappresenta il 75% - 85% dei tumori epatici primari. L'epatectomia, l'ablazione con radiofrequenza (RFA) e il trapianto di fegato ortotopico rappresentano le principali opzioni di trattamento per i pazienti con HCC in stadio iniziale.2 L'epatectomia è indicata solo nei pazienti con HCC in stadio iniziale e funzionalità epatica conservata, mentre l'applicazione del trapianto di fegato è limitata a livello globale a causa della carenza di organi. La RFA è quindi il trattamento più efficace nei pazienti con HCC e funzionalità epatica borderline dovuta a cirrosi epatica, soprattutto nella regione Asia-Pacifico dove l’infezione da epatite B è prevalente.

L'ablazione termica uccide i tumori attraverso la denaturazione termica diretta e la coagulazione delle proteine ​​tumorali.3 La ritenzione di cellule tumorali devitalizzate e danneggiate all’interno del corpo stimola una robusta risposta infiammatoria. È stato inoltre riportato che l'ablazione termica crea una fonte di antigene tumorale per la generazione di immunità antitumorale e migliora le risposte immunitarie dell'ospite.4 Le piastrine attivate rilasciano interleuchina (IL) -1, fattore di necrosi tumorale (TNF) e fattore di crescita trasformante, che aumentano la permeabilità vascolare e promuovono la chemiotassi. I neutrofili sono attratti dal sito di ablazione ed eseguono la rimozione dei detriti rilasciando radicali liberi attraverso meccanismi di scoppio ossidativo volti a distruggere gli agenti stimolanti. Segue la migrazione dei macrofagi, che passa allo stadio proliferativo, durante il quale i macrofagi secernono fattori di crescita, tra cui il TNF, il fattore di crescita dell'endotelio vascolare (VEGF) e il fattore basico di crescita dei fibroblasti.5 Il livello di attività proliferativa dei macrofagi e dei linfociti è mediato positivamente dall'IL-6 e negativamente dall'IL-10.6, 7 In caso di ablazione incompleta o quasi completa, le cellule tumorali vitali nella zona di ablazione subletale possono essere influenzato positivamente o negativamente dalla concomitante risposta infiammatoria compreso l’aumento dei livelli di citochine e fattori di crescita. L'infiammazione successiva all'ablazione può avere effetti negativi attraverso la produzione di fattori di crescita e citochine da parte di macrofagi e linfociti, che potrebbero stimolare la crescita delle cellule tumorali all'interno della zona subletale.8 Studi sull'uomo e sugli animali che utilizzano la colorazione immunoistochimica dei tessuti, il test immunoassorbente enzimatico dei lisati tissutali e il test immunoassorbente legato enzimatico del plasma hanno mostrato un aumento significativo di specifici mediatori infiammatori e immunomodulatori dopo RFA.9, 10 Il ricercatore principale ha precedentemente riportato il risposte infiammatorie alla RFA utilizzando il modello di fegato suino che il livello dei marcatori infiammatori sistemici (TNF e IL-1) era significativamente elevato dopo RFA, rispetto all'epatectomia.11 Sebbene gli studi preclinici sulle risposte infiammatorie della termoablazione per i tumori epatici siano sostanziali, la correlazione clinica di queste reazioni microambientali è limitata in letteratura. Erinjeri et al.12 hanno riferito che il tipo di ablazione e la diagnosi primaria hanno predetto il cambiamento di IL-6 e l'età del paziente ha predetto il cambiamento di IL-10 dopo l'ablazione termica dei tumori. L'IL-6 può agire come surrogato della morte cellulare immunogenica e la combinazione di procedure immunogeniche che inducono la morte con un inibitore del check-point immunitario può essere utile per prolungare la sopravvivenza del paziente dopo RFA.13 A livello cellulare, è stato dimostrato che la RFA migliora la risposta delle cellule T antigene-specifiche associate al tumore e ciò contribuisce alla sopravvivenza libera da recidiva dei pazienti con HCC.14 Tuttavia, non è ancora chiara la possibile relazione tra il cambiamento delle citochine indotto da RFA e il suo valore prognostico sulla recidiva del tumore e sulla sopravvivenza a lungo termine del paziente.

Lo sperimentatore principale ha riportato i risultati di 209 pazienti trattati con RFA come unico trattamento per l'HCC.15 Il tasso complessivo di recidiva del tumore è stato fino all’80% con un follow-up mediano di 26 mesi. Pertanto, l’identificazione dei pazienti ad alto rischio che potrebbero sviluppare una recidiva precoce utilizzando biomarcatori surrogati (ad es. citochine) comporta un’importante implicazione clinica sull’uso del trattamento adiuvante (ad es. inibitore del check-point immunitario).

Pertanto, i ricercatori propongono questo studio prospettico monocentrico per analizzare la variazione del livello di citochine sieriche nei pazienti con HCC trattati con RFA o MWA. Il risultato verrà utilizzato per correlare l'esito clinico dei pazienti, in particolare la recidiva del tumore e l'esito della sopravvivenza a lungo termine. Questo studio clinico proposto è di importanza clinica per stabilire il potenziale ruolo della risposta immunitaria come biomarcatori surrogati per prevedere l'esito a lungo termine del paziente. Stabilisce la piattaforma per lo studio futuro del trattamento adiuvante utilizzando un inibitore del check-point immunitario per i pazienti con HCC trattati con RFA o altra terapia termoablativa. Il centro dei ricercatori è un centro di riferimento terziario a Hong Kong che gestisce pazienti con malattie epatobiliari e pancreatiche complicate. Il numero di nuovi casi di pazienti con HCC gestiti nel centro di ricerca è di circa 200 ogni anno e il numero di pazienti con HCC sottoposti a epatectomia è di circa 80 ogni anno. Tutti i ricercatori sono esperti con una vasta esperienza nella ricerca clinica e di base su pazienti affetti da HCC. I ricercatori hanno condotto e pubblicato su riviste internazionali numerosi studi randomizzati sulla gestione dell’HCC e su altri aspetti della chirurgia epatobiliare.16-19

Ipotesi RFA o MWA per l'HCC potrebbero indurre una risposta immunitaria infiammatoria con conseguente cambiamento nel livello di citochine. Questa reazione microambientale potrebbe regolare positivamente o negativamente le cellule tumorali residue, portando a cambiamenti significativi nella recidiva del tumore e nella sopravvivenza a lungo termine del paziente.

Scopo dello studio Questo studio prospettico si propone di indagare il cambiamento del livello di citochine in seguito a RFA o MWA per l'HCC e la sua correlazione clinica con la recidiva del tumore e i dati di sopravvivenza a lungo termine dei pazienti. L'outcome primario è la recidiva precoce del tumore entro un anno dalla RFA. Le misure di esito secondario sono rappresentate da altri tipi di recidiva tumorale (recidiva intraepatica tardiva e metastasi extraepatiche), sopravvivenza globale e sopravvivenza libera da recidiva.

L'outcome primario è la recidiva precoce del tumore intraepatico entro un anno dopo RFA e MWA. Le misure di esito secondario sono rappresentate da altri tipi di recidiva tumorale (recidiva intraepatica tardiva e metastasi extraepatiche), sopravvivenza globale e sopravvivenza libera da recidiva.

Analisi del livello di citochine utilizzando campioni di siero dei pazienti studiati

Analiti disponibili:

IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12 (p40), IL-12 (p70), TNF-α, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CCL2, CCL5

Kit disponibile in commercio:

MILLIPLEX MAP Pannello di microsfere magnetiche per citochine/chemochine umane - Test immunologico multiplex

Applicazione del kit:

Analizza simultaneamente più biomarcatori di citochine e chemochine con il pannello magnetico di citochine/chemochine umane MILLIPLEX MAP - Immunology Multiplex Assay, in campioni di siero, plasma e colture cellulari umani. Questo è un test di incubazione notturna.

Tempo previsto per lo studio L'istituzione dei ricercatori è un importante centro di riferimento terziario per l'HCC a Hong Kong. Il reclutamento dei pazienti verrà avviato una volta ottenuta l'approvazione da parte del comitato di revisione dell'istituto. Il periodo di reclutamento è di circa 12 mesi a 18 mesi. Con un periodo di follow-up mediano di circa 18 mesi, si prevede che il periodo totale di studio sia di tre anni.

Stima della dimensione del campione Il numero previsto di pazienti da reclutare è stimato a 60 in base al numero di pazienti precedentemente sottoposti a trattamento presso il dipartimento.

Analisi statistica Tutti i dati verranno raccolti prospetticamente da un assistente di ricerca e informatizzati in un database. L'analisi statistica verrà effettuata mediante il test del Chi-quadrato o il test esatto di Fisher, ove appropriato, per confrontare variabili discrete e il test U di Mann-Whitney per confrontare variabili continue. La sopravvivenza cumulativa sarà calcolata con il metodo Kaplan-Meier e confrontata con il Log-rank test. Verrà effettuata un'analisi multivariata utilizzando il modello di regressione logistica per identificare i fattori prognostici indipendenti che influenzano la recidiva precoce del tumore.

Considerazione etica Questo studio sarà condotto in conformità con la Dichiarazione di Helsinki dell'Associazione medica mondiale e la Conferenza internazionale sull'armonizzazione - Buona pratica clinica.

Consenso Il consenso volontario scritto sarà ottenuto dopo la spiegazione completa dello studio al paziente prima dell'intervento e della randomizzazione.

Rilevanza per le applicazioni cliniche

Questo studio ha una significativa influenza clinica sulla gestione chirurgica dei pazienti affetti da HCC. Poiché l’infezione da epatite B è ancora endemica nell’area dell’Asia-Pacifico come Hong Kong, l’HCC correlato all’epatite B rappresenta ancora un peso per l’intero gruppo di pazienti affetti da cancro. Questo studio mira a stabilire il ruolo potenziale della risposta immunitaria come biomarcatori surrogati per prevedere l'esito a lungo termine del paziente. Migliora lo sviluppo della piattaforma per lo studio futuro del trattamento adiuvante utilizzando un inibitore del check-point immunitario per i pazienti con HCC trattati con terapia termoablativa.