Изменение цитокинов при гепатоцеллюлярной карциноме, леченной термической абляцией

Актуальность проблемы Рак печени является шестым по распространенности злокачественным заболеванием в мире. Это четвертая по значимости причина смертности от рака, и в 2018 году на нее было зарегистрировано более 840 000 новых случаев1. На долю гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК) приходится 75–85% случаев первичного рака печени. Гепатэктомия, радиочастотная абляция (РЧА) и ортотопическая трансплантация печени являются основными вариантами лечения пациентов с ранней стадией ГЦК.2 Гепатэктомия показана только пациентам с ранней стадией ГЦК и сохранной функцией печени, тогда как применение трансплантации печени ограничено во всем мире из-за нехватка органов. Таким образом, РЧА является наиболее эффективным методом лечения пациентов с ГЦК и пограничной функцией печени из-за цирроза печени, особенно в Азиатско-Тихоокеанском регионе, где распространена инфекция гепатита В.

Термическая абляция убивает опухоли посредством прямой термической денатурации и коагуляции опухолевых белков.3 Сохранение нежизнеспособных и поврежденных опухолевых клеток в организме стимулирует мощную воспалительную реакцию. Также сообщалось, что термическая абляция создает источник опухолевого антигена для выработки противоопухолевого иммунитета и усиливает иммунные реакции хозяина.4 Активированные тромбоциты высвобождают интерлейкин (IL)-1, фактор некроза опухоли (TNF) и трансформирующий фактор роста, которые увеличивают проницаемость сосудов и способствуют хемотаксису. Нейтрофилы притягиваются к месту абляции и выполняют очистку от мусора, высвобождая свободные радикалы посредством механизмов окислительного взрыва, направленных на разрушение провоцирующих агентов. Происходит миграция макрофагов с переходом к пролиферативной стадии, во время которой макрофаги секретируют факторы роста, включая TNF, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и основной фактор роста фибробластов.5 Уровень пролиферативной активности макрофагов и лимфоцитов опосредован IL-6 положительно и IL-10 отрицательно.6, 7 В случае неполной или почти полной абляции жизнеспособные опухолевые клетки в сублетальной зоне абляции могут быть на него положительно или отрицательно влияет сопутствующая воспалительная реакция, включая повышенные уровни цитокинов и факторов роста. Воспаление после абляции может иметь негативные последствия из-за выработки макрофагами и лимфоцитами факторов роста и цитокинов, которые могут стимулировать рост опухолевых клеток в сублетальной зоне.8 Исследования на людях и животных с использованием иммуногистохимического окрашивания тканей, иммуноферментного анализа лизатов тканей и иммуноферментного анализа плазмы показали значительное увеличение специфических воспалительных и иммуномодулирующих медиаторов после РЧА.9, 10 Главный исследователь ранее сообщал о воспалительные реакции РЧА с использованием модели печени свиньи показали, что уровень системных воспалительных маркеров (TNF и IL-1) был значительно повышен после РЧА по сравнению с гепатэктомией.11 Хотя доклинические исследования воспалительных реакций на термическую абляцию опухолей печени являются значительными, клиническая корреляция этих реакций с микроокружением в литературе ограничена. Erinjeri et al.12 сообщили, что тип абляции и первичный диагноз предсказывали изменение IL-6, а возраст пациента предсказывал изменение IL-10 после термической абляции опухолей. IL-6 может выступать в качестве заменителя иммуногенной гибели клеток, а сочетание процедур, вызывающих иммуногенную смерть, с ингибитором иммунных контрольных точек может быть полезным для продления выживаемости пациентов после РЧА.13 Доказано, что на клеточном уровне RFA усиливает опухолеассоциированный антигенспецифический Т-клеточный ответ, и это способствует безрецидивной выживаемости пациентов с ГЦК.14 Тем не менее, до сих пор не ясно о возможной взаимосвязи между изменением цитокинов, вызванным РЧА, и его прогностическим значением в отношении рецидива опухоли и долгосрочной выживаемости пациентов.

Главный исследователь сообщил о результатах 209 пациентов, получавших РЧА в качестве единственного метода лечения ГЦК.15 Общая частота рецидивов опухоли составляла до 80% при медиане наблюдения 26 месяцев. Следовательно, выявление пациентов высокого риска, у которых может развиться ранний рецидив, с использованием суррогатных биомаркеров (например, цитокины) имеет важное клиническое значение при использовании адъювантного лечения (например, ингибитор иммунных контрольных точек).

Поэтому исследователи предлагают это одноцентровое проспективное исследование для анализа изменения уровня цитокинов в сыворотке крови у пациентов с ГЦК, получавших радиочастотную анемию или MWA. Результат будет использоваться для корреляции клинических исходов пациентов, особенно рецидива опухоли и долгосрочного результата выживаемости. Предлагаемое клиническое исследование имеет клиническое значение для установления потенциальной роли иммунного ответа в качестве суррогатного биомаркера для прогнозирования долгосрочного результата лечения пациентов. Он создает основу для будущих исследований адъювантного лечения с использованием ингибитора иммунных контрольных точек для пациентов с ГЦК, получающих радиочастотную абляционную терапию или другую термоаблятивную терапию. Исследовательский центр представляет собой третичный специализированный центр в Гонконге, где лечат пациентов с осложненными заболеваниями гепатобилиарной системы и поджелудочной железы. Число новых случаев ГЦК, находящихся на лечении в исследовательском центре, составляет около 200 каждый год, а количество пациентов с ГЦК, подвергающихся гепатэктомии, составляет около 80 каждый год. Все исследователи являются специалистами, имеющими большой опыт клинических и фундаментальных исследований больных ГЦК. Исследователи провели и опубликовали в международных журналах несколько рандомизированных исследований по лечению ГЦК и другим аспектам гепатобилиарной хирургии.16-19

Гипотеза RFA или MWA при ГЦК могут вызывать воспалительный иммунный ответ, приводящий к изменению уровня цитокинов. Эта реакция микроокружения может положительно или отрицательно регулировать остаточные опухолевые клетки, что приводит к значительным изменениям в рецидивах опухоли и долгосрочной выживаемости пациентов.

Цель исследования Целью данного проспективного исследования является изучение изменения уровня цитокинов после РЧА или МВА при ГЦК и его клинической корреляции с рецидивом опухоли и данными долгосрочной выживаемости пациентов. Первичным критерием оценки является ранний рецидив опухоли в течение года после РЧА. Вторичными критериями оценки являются другие виды рецидивов опухоли (поздний внутрипеченочный рецидив и внепеченочные метастазы), общая выживаемость и безрецидивная выживаемость.

Первичным критерием оценки является ранний рецидив внутрипеченочной опухоли в течение одного года после РЧА и МВА. Вторичными критериями оценки являются другие виды рецидивов опухоли (поздний внутрипеченочный рецидив и внепеченочные метастазы), общая выживаемость и безрецидивная выживаемость.

Анализ уровня цитокинов с использованием исследуемых образцов сыворотки крови пациентов

Доступные аналиты:

IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12 (p40), IL-12 (p70), TNF-α, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CCL2, CCL5

Коммерчески доступный комплект:

Панель магнитных шариков MILLIPLEX MAP человека с цитокинами/хемокинами — иммунологический мультиплексный анализ

Применение комплекта:

Одновременно анализируйте множественные биомаркеры цитокинов и хемокинов с помощью MILLIPLEX MAP Панель магнитных шариков человеческих цитокинов/хемокинов — иммунологический мультиплексный анализ в образцах сыворотки, плазмы и клеточных культур человека. Это ночной инкубационный анализ.

Ожидаемое время обучения Институт исследователей является крупным специализированным центром третичного уровня ГЦК в Гонконге. Набор пациентов начнется после получения одобрения Наблюдательного совета учреждения. Срок набора составляет от 12 до 18 месяцев. При среднем периоде наблюдения около 18 месяцев ожидается, что общий период обучения составит три года.

Оценка размера выборки Ожидаемое количество пациентов, которые будут набраны, оценивается в 60 в соответствии с количеством пациентов, проходивших лечение в отделении в прошлом.

Статистический анализ Все данные будут проспективно собраны научным сотрудником и компьютеризированы в базе данных. Статистический анализ будет проводиться с помощью критерия Хи-квадрат или точного критерия Фишера, где это необходимо, для сравнения дискретных переменных и U-критерия Манна-Уитни для сравнения непрерывных переменных. Совокупная выживаемость будет рассчитываться по методу Каплана-Мейера и сравниваться с помощью лог-рангового теста. Многофакторный анализ с использованием модели логистической регрессии будет проведен для выявления независимых прогностических факторов, влияющих на ранний рецидив опухоли.

Этические соображения. Данное исследование будет проводиться в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации и Международной конференцией по гармонизации – Надлежащая клиническая практика.

Согласие Письменное добровольное согласие будет получено после полного объяснения пациенту сути исследования перед операцией и рандомизацией.

Актуальность для клинических применений

Это исследование оказывает значительное клиническое влияние на хирургическое лечение пациентов с ГЦК. Поскольку инфекция гепатита В по-прежнему является эндемической в ​​Азиатско-Тихоокеанском регионе, например, в Гонконге, ГЦК, связанный с гепатитом В, по-прежнему является бременем среди всей группы больных раком. Целью данного исследования является установление потенциальной роли иммунного ответа как суррогатного биомаркера для прогнозирования долгосрочного исхода заболевания у пациентов. Это способствует развитию платформы для будущего изучения адъювантного лечения с использованием ингибитора иммунных контрольных точек у пациентов с ГЦК, получающих термоаблятивную терапию.