IL-6R 阻断后组织和循环中的急性运动和 NK 细胞调节

目标：

主要目标：

• 探讨急性运动、IL-6 阻断和循环中 NK 调节之间的关联。
• 使用单细胞 RNA 测序探索运动激活的 NK 细胞是否具有独特的表型。

次要目标：

• 探讨急性有氧运动对健康年轻男性循环、肌肉和脂肪组织中 NK 细胞数量和活性的影响，以间接探索运动作为一种抗癌疗法。
• 评估 NK 细胞反应的动力学，如果可能，按时间顺序研究活化的 NK 细胞的出现和下落。

探索目标

• 建立一个可重复的协议来跟踪各种免疫细胞及其在人类急性运动反应中的参与
• 研究运动过程中肌肉释放的具有免疫学重要性的新型信号分子。
• 调查运动诱导的 IL-6 对运动和食物摄入后饥饿和饱腹感的主观感觉的可能作用。 • 使用质谱法探索 IL-6 受体阻断对运动蛋白质组和代谢组的影响

方法：

30 名健康的休闲活跃年轻男性将被纳入这项急性运动研究，其中将研究 NK 细胞动力学和调节以响应急性有氧运动和 IL-6R 阻断或安慰剂。

该研究包括 2 次访问。 纳入时（访问 1），所有受试者都将接受评估，包括：基线医学筛查（听诊、血压、ECG）、身体成分测定（DXA）、心血管健康（最大摄氧量）和标准空腹血液生化，这些将立即进行分析。 访问 2 将包括分别从显性腿和腹部皮下脂肪库（均在休息条件下）进行的肌肉和脂肪活检，然后将其作为进一步组织分析的参考组织。 然后，在开始 IL-6R 输注之前，将确保 18G 肘前外周静脉通路。 输注程序后 2 小时，受试者将接受急性运动方案。 然后，将使用自行车测力计对受试者进行高强度急性有氧运动挑战。 在食欲调节子研究中，将在输液和运动之前、运动期间以及运动后立即、½、1、1½ 和 2 小时以及运动后 4 小时抽取血样。 将立即分析血液样本的白细胞计数和分化以及血浆生物化学。 此外，血液样本将用于 NK 细胞分离，随后进行单细胞 RNA 测序、免疫细胞分布和对癌细胞的杀伤能力。 此外，将收集并冷冻血浆样本用于以后测定皮质醇、催乳素和循环细胞因子，包括但不限于 IL-6 和 G-CSF。 最后，在食欲亚研究中，将测量胰岛素、GLP-1 和游离脂肪酸。

组织样本将在运动后 2 小时获取，以优化基因表达分析。 肌肉和脂肪组织样本将分析炎症和抗炎标记物、NK 细胞含量和这些 NK 细胞的表型，使用从单细胞测序获得的标记物，对血源性 NK 细胞进行。 此外，将使用组织学评估免疫细胞浸润。 所有组织样本都将在局部麻醉期间在无菌条件下使用 Bergström 针获取，以尽量减少任何与样本相关的不适或感染。

组织样本后，将提供随意进餐，受试者可以吃多少就吃多少，但被告知不要过量食用，因为任何剩余的食物都可以带回家。 将给予扑热息痛 (1.5g) 以评估胃排空。

所有参与者将在一天中大致相同的时间（上午 9 点）进行 2 次研究访问 研究完成后，任何剩余材料将被转移到 CFAS 生物样本库。

受试者：包括的受试者将是 30 名活跃于娱乐活动、受过适度训练、健康的 18-40 岁年轻男性。 排除标准是：心血管、风湿病和代谢疾病、精英运动或高有氧训练状态。 长期使用非甾体抗炎药 (NSAID) 或其他免疫抑制剂。

干预：受试者将被随机分配到急性运动组，有 (n=15) 或没有 (n=15) 先前的 IL-6R 阻断剂。 运动干预将包括在固定自行车测力计上进行的高强度 ≈45 分钟间歇有氧运动。 在以 HRmax 的 50-60% 进行最初的 5 分钟热身后，受试者将在 HRmax 的 90% 以上进行 7 次口头鼓励的 3 分钟间隔，中间穿插 3 分钟的低强度踩踏板。 将在运动前、运动中以及运动后 ½、1、1½ 和 2 小时抽取血样，并在 2 小时时间点采集组织样本。

为评估食欲调节，将在运动后 2 至 4 小时抽取更多血液样本。

统计考虑：根据我们试点研究的数据，我们预计与 CON 相比，IL6R 抑制组的最大 NK 细胞动员降低 ≈ 45%，IL6R 抑制组获得的最低值与 NK 细胞最低点的差异为 29%。 假设双侧检验的显着性水平为 5%，我们需要在每组中包括 9 名患者，以达到 90% 的功效来检测干预组中 45% 的相对差异。 为了考虑到潜在的辍学/排除，由于有点侵入性的设置，我们将包括总共 30 名患者（每组 15 名）。

招募：将通过 forsøgsperson.dk 或类似网站以及相关网站上的广告招募受试者。

受试者将通过 CFAS 与我们联系，并可以选择是否接收研究信息。 电话（从而拒绝旁观者的选择）或在 CFAS 面对面的会议。 所有这些信息将由主要研究者提供。 如果受试者有兴趣了解更多研究内容，相关文件将通过电子邮件发送。 如果受试者在收到书面或口头信息后有兴趣加入研究，他将有 24 小时的时间考虑是否参与研究。 当通过电话或面对面通知受试者并接受研究参与时，他将被邀请访问 1，在那里将获得书面知情同意书（或由参与者签署并从家中携带）。

风险和不良反应：受试者可能会对血液和组织样本感到轻微不适。 抽取的血量可以忽略不计，不会带来任何健康风险。 所有组织取样都将在局部麻醉期间在无菌条件下进行，因此疼痛或不适感很小，感染风险也很小。 在运动测试期间，参与者可能会感到呼吸急促。

IL-6R 抑制通常耐受性良好，只有很少的副作用。 扑热息痛的剂量很低，与任何风险无关。

相关医生的联系信息将在研究纳入时提供给参与者，以便报告和解决任何不良事件。

研究结果的传播：正面、负面和不确定的结果都将发表在相关的国际科学期刊上。

伦理考虑：该项目预计会造成有限的风险、副作用和不适。 所有程序将由经验丰富的医生和生理学家在相关安全的情况下执行。 Tocilizumab 通常耐受性良好，扑热息痛的剂量较低。 纳入的受试者可以随时在没有正当理由的情况下撤回他们对研究参与的同意。 我们认为该项目很重要，并将提供有关 IL-6 可修饰 NK 细胞对循环以及脂肪和肌肉组织中急性运动的反应的重要新信息（因为目前对后者的了解非常有限）。

该研究被 Lægemiddelstyrelsen 视为工具箱研究，因此不属于药物研究