IL-6R遮断後の組織および循環における急性運動とNK細胞調節

目的:

第一目的：

• 循環中の急性運動、IL-6 遮断および NK 調節の間の関連性を調査すること。
• 単一細胞 RNA シーケンスを使用して、運動によって活性化された NK 細胞が独自の表現型を持っているかどうかを調べる。

副次的な目的:

• 抗がん剤としての運動を間接的に調査するために、健康な若い男性の循環、筋肉、脂肪組織の NK 細胞数と活性に対する急性有酸素運動の影響を調査すること。
• NK 細胞応答の動態を評価し、可能であれば、活性化された NK 細胞の出現と所在を年代順に調査します。

探索目的

• さまざまな免疫細胞とそれらの人間の急性運動反応への関与を追跡するための再現可能なプロトコルを確立する
• 免疫学的に重要な、運動中に筋肉から放出される新しいシグナル分子を調査する。
• 運動後および食物摂取後の主観的な空腹感および満腹感に対する運動誘発性IL-6の役割の可能性を調査すること。 • 質量分析を使用して、運動プロテオームとメタボロームに対する IL-6 受容体遮断の効果を調査する

方法:

30 人の健康でレクリエーション活動をしている若い男性がこの急性運動研究に含まれ、急性有酸素運動と IL-6R 遮断またはプラセボに反応して NK 細胞の動態と調節が研究されます。

研究は2回の訪問で構成されています。 包含時（訪問1）、すべての被験者は、ベースラインの医学的スクリーニング（聴診、血圧、ECG）、体組成の決定（DXA）、心血管フィットネス（VO2max）、およびすぐに分析される標準的な空腹時血液生化学を含む評価を受けます。 訪問 2 は、利き足と腹部の皮下脂肪デポからの筋肉と脂肪の生検で構成されます (両方とも安静状態で)。これは、さらなる組織分析のための参照組織として機能します。 次に、IL-6R 注入を開始する前に、18G 肘前末梢静脈アクセスを確保します。 注入手順の2時間後、被験者は急性運動プロトコルを受けます。 被験者はその後、自転車エルゴメーターを利用して、高強度の急性有酸素運動に挑戦します。 血液サンプルは、注入および運動の前、運動中、ならびに運動の直後、1/2、1、1/2、および 2 時間後、および食欲調節サブスタディでの運動後 4 時間まで採取されます。 血液サンプルは、白血球数と分化、および血漿生化学について直ちに分析されます。 さらに、血液サンプルは NK 細胞の分離に利用され、その後の単一細胞 RNA シーケンシング、免疫細胞の分布、および癌細胞に対する殺傷能力が得られます。 さらに、コルチゾール、プロラクチン、循環サイトカイン（IL-6およびG-CSFを含むがこれらに限定されない）を後で測定するために、血漿サンプルを採取して凍結します。 最後に、食欲サブスタディでは、インスリン、GLP-1、および遊離脂肪酸が測定されます。

組織サンプルは、遺伝子発現解析を最適化するために運動の 2 時間後に取得されます。 筋肉と脂肪組織の両方のサンプルは、炎症性および抗炎症性マーカー、NK 細胞含有量、および血液由来の NK 細胞で行われた単一細胞シーケンシングから得られたマーカーを使用したこれらの NK 細胞の表現型について分析されます。 さらに、免疫細胞浸潤は、組織学を使用して評価されます。 すべての組織サンプルは、サンプル関連の不快感や感染を最小限に抑えるために、局所麻酔中に無菌条件下で Bergström 針を使用して取得されます。

組織サンプルの後、自由に食事が提供されます。被験者はできるだけ多く食べることができますが、食べ残しは持ち帰ることができるため、食べ過ぎないように指示されます。 パラセタモール（1.5g）をロバの胃内容物排出に与える。

すべての参加者は、その日のほぼ同じ時間（午前9時）に2回の研究訪問を受けます。 研究の完了後、残りの材料は CFAS バイオバンクに転送されます。

被験者: 含まれる被験者は、18 ～ 40 歳の、レクリエーション活動が活発で、適度に訓練された、健康な若い男性 30 人です。 除外基準は次のとおりです。 非ステロイド性抗炎症薬（NSAID）またはその他の免疫抑制剤の慢性使用。

介入: 被験者は、事前に IL-6R 遮断がある (n=15) またはない (n=15) 急性運動に無作為に割り付けられます。 運動介入は、固定自転車エルゴメーターで実施される、非常に負担のかかる約 45 分間のインターバルベースの有酸素運動で構成されます。 HRmax の 50 ～ 60% での最初の 5 分間のウォームアップの後、被験者は 90% HRmax を超える 3 分間の間隔で、3 分間の低強度のペダリングを散在させながら、7 回、口頭で奨励されます。 血液サンプルは、運動前、運動中、運動直後、1/2、1、1½、および 2 時間後に、2 時間の時点での組織サンプリングとともに採取されます。

食欲調節を評価するために、運動後 2 時間から 4 時間の間にさらに血液サンプルを採取します。

統計的考察: パイロット研究のデータに基づいて、IL6R 阻害群では最大 NK 細胞動員が CON と比較して約 45% 低く、NK 細胞最下点で 29% の差があり、IL6R 阻害群で得られた最低値であると予想されます。 両側検定で 5% の有意水準を仮定すると、介入群で 45% の相対差を検出する 90% の検出力を達成するには、各群に 9 人の患者を含める必要があります。 やや侵襲的な設定のため、脱落/除外の可能性を考慮して、合計30人の患者を含めます（グループごとに15人）。

募集: 被験者は forsøgsperson.dk または関連サイトでの広告と同様のサイトを通じて募集されます。

被験者は CFAS に連絡し、研究情報を事前に受け取るかどうかを選択できます。 電話（それによって傍観者の選択肢を否定する）またはCFASでの対面会議。 このすべての情報は、主治医によって提供されます。 被験者が研究の詳細を聞くことに興味がある場合は、関連文書が電子メールで送信されます。 被験者が書面または口頭で情報を受け取った後に研究への参加に関心がある場合、研究への参加を検討するのに24時間かかります。 被験者が電話または対面で通知され、研究への参加を受け入れると、被験者は 1 を訪問するように招待され、そこで書面によるインフォームド コンセントが得られます (または参加者が署名して自宅から持参します)。

リスクと有害反応: 被験者は、血液や組織のサンプルに関して軽度の不快感を覚える場合があります。 採取された血液量はごくわずかであり、健康上のリスクとは関係ありません。 組織のすべてのサンプリングは、局所麻酔中に無菌条件下で行われるため、痛みや不快感がほとんどなく、感染のリスクもほとんどありません。 運動テスト中に、参加者は息切れを経験することがあります。

IL-6R 阻害は一般に忍容性が高く、副作用はほとんどありません。 パラセタモールの投与量は低く、リスクはありません。

関与する医師の連絡先情報は、研究の参加時に参加者に提供されるため、有害事象を報告して解決することができます。

研究結果の普及: 肯定的、否定的、および決定的でない結果の両方が、関連する国際科学雑誌に掲載されます。

倫理的配慮: このプロジェクトは限定的なリスク、副作用、および不快感を引き起こすと予想されます。 すべての手順は、関連する安全性を備えた経験豊富な医師と生理学者によって実行されます。 トシリズマブは一般的に忍容性が高く、パラセタモールの投与量は少ないです。 含まれる被験者は、いつでも正当な理由なく、研究参加の同意を撤回することができます。 私たちは、このプロジェクトが重要であり、循環と脂肪および筋肉組織の両方における急性運動に対する IL-6 修飾可能 NK 細胞応答に関する重要な新しい情報に貢献すると考えています (後者に関する知識は現在非常に限られているため)。

この研究はLægemiddelstyrelsenによるツールボックス研究と見なされているため、製薬研究ではありません