Zkouška dárcovských T-buněk senzibilizovaných pentadekapeptidy proteinu CMV-PP65 pro léčbu infekcí cytomegalovirem (CMV) po alogenních transplantacích hematopoetických kmenových buněk

Kritéria pro zařazení:

Před přijetím léčby mohou někteří pacienti podstoupit diagnostické a/nebo jiné testování jejich tkáně, pokud je k dispozici, aby se zjistilo, zda jejich buňky infikované CMV pravděpodobně reagují na léčbu pomocí T buněk specifických pro CMV. Alternativně mohou být pro výzkumné testy vyžadovány vzorky krve, aby se zjistilo, že CMV-specifické T-buňky neobsahují žádné buňky, které by mohly reagovat proti pacientovi. Tito pacienti podepíší samostatný souhlas před léčbou. Pokud se zjistí, že se pacient kvalifikuje a může mít prospěch z infuzí CMV CTL, podepíše souhlas se standardní léčbou pro MSKCC IRB # 05-065 a bude zařazen a léčen ve studii, pokud všechny ostatní způsobilosti jsou splněna kritéria.

• Každý pacient musí splňovat alespoň jedno z následujících kritérií:
• Pacient musí mít klinicky zdokumentovaný stav spojený s CMV (např. intersticiální pneumonie, hepatitida, retinitida) nebo
• Pacient musí mít mikrobiologický důkaz CMV virémie nebo tkáňové invaze potvrzené virovou kulturou nebo detekcí CMV antigenemie nebo detekcí hladin CMV DNA v krvi nebo tělesných tekutinách v souladu s CMV infekcí.
• CMV infekce pacienta klinicky progreduje nebo CMV virémie přetrvává nebo se zvyšuje (jak dokazuje kvantifikace CMV antigenémie nebo CMV DNA v krvi) navzdory dvoutýdenní indukční léčbě antivirotiky.
• U pacienta se vyvinula CMV virémie, což bylo potvrzeno virovou kultivací nebo detekcí CMV antigenémie nebo detekcí hladin CMV DNA v krvi nebo tělesných tekutinách, zatímco dostával profylaktické dávky antivirotik k prevenci CMV infekce po transplantaci. nebo
• pacient není schopen udržet léčbu antivirotiky kvůli toxicitám souvisejícím s léky (např. myelosuprese [ANC < 1000 ul/ml bez podpory GCSF] nebo nefrotoxicita [upravená clearance kreatininu < nebo rovna 60 ml/min/1,73 m2 nebo kreatinin > 2 mg/dl]).
• Protože infekce CMV jsou život ohrožující a mohou postihnout plíce, játra, gastrointestinální trakt, hematopoetický a centrální nervový systém a antivirová léčiva mohou také ohrozit renální a hematopoetické funkce, dysfunkce těchto orgánů neovlivní způsobilost pro tento protokol.

Aby však byli způsobilí, pacienti by měli splňovat následující klinická kritéria:

• Musí mít stabilní krevní tlak a oběh, nevyžadující podporu tlaku.
• Měli by mít adekvátní srdeční funkci, jak je prokázáno EKG a/nebo echokardiografickým průkazem.
• Měli by mít očekávanou délku života, i když vyžadují podporu dýchacích cest, alespoň 3 týdny.
• Nejsou žádná věková omezení způsobilosti pro tento protokol.

Kritéria vyloučení:

• Pacienti vyžadující vysoké dávky glukokortikosteroidů (>0,5 mg/kg prednisonu nebo jeho ekvivalentu) jako léčbu aktivní (stupeň 2-4) akutní reakce štěpu vs. hostitel (GVHD) nebo chronické GVHD.
• Pacienti, kteří umírá.
• Pacienti s jinými stavy, které nesouvisejí s infekcí CMV (např. nekontrolovaná bakteriální sepse nebo invazivní plísňová infekce), které jsou rovněž život ohrožující a které by znemožnily hodnocení účinků infuze T buněk.

Způsobilost dárce pro dárcovství krevních lymfocytů pro tvorbu

CMV-specifické T buňky získané od dárce:

Adekvátní zdraví pro dárcovství, jak je stanoveno institucionálními (příbuzný dárce) nebo NMDP (nepříbuzný dárce) směrnicemi. Normální dárci budou hodnoceni na důkaz předchozí senzibilizace na CMV pomocí CMV sérologie. Budou také typovány pro HLA A, B, C a DR. Pro příjemce alogenního transplantátu hematopoetických progenitorových buněk (HSCT) bude dárce transplantované dřeně představovat dárce volby, protože tyto T-buňky porostou a přetrvávají u pacienta, který již transplantoval od tohoto dárce. Pokud je však dárce HSCT séronegativní na CMV nebo není dostupný (např. transplantát pupečníkové krve nebo nepříbuzný dárce, který ještě nedaroval T-buňky pro adoptivní terapii), CMV-specifické T-buňky generované od séropozitivního dárce se shodují alespoň Mohou být použity 2 alely HLA sdílené pacientem.

Normální dárci splňující tato kritéria, kteří souhlasí s darováním krve pro vytvoření CMV-specifických T-buněk pro adoptivní terapeutické účely, obdrží podrobné klinické hodnocení, včetně anamnézy, fyzikálního vyšetření a sérologického testování na přenosná onemocnění do 1 týdne od darování. včetně hepBs Ag a protilátek proti hepatitidě C, HIV-1 a 2, HTLV-1 a 2, CMV (pouze pokud byly dříve negativní), VDRL, WNV a Chagas Dárce HIV+ bude odmítnut ze zdravotních důvodů. Dárci musí mít hodnotu Hgb > 10 gm/dl a musí být schopni podstoupit jednu 3-6jednotkovou leukaferézu (výhodně) nebo jednu jednotku krve pro T buňky (pro dětské dárce ne více než 5 ml/kg na žádném odběr krve).

Potenciální dárce bude informován o účelech této studie a jejích požadavcích. Pokud bude souhlasit, bude dárce požádán o poskytnutí dvou vzorků krve:

i. Počáteční darování 25 ml krve antikoagulované heparinem nebo ACD. Tato krev se použije k vytvoření B buněčné linie transformované laboratorním kmenem B95.8 EBV. Tato EBV+ B buněčná linie/ (EBVBLCL) bude použita jako buňka prezentující antigen. Když se naplní souborem pentadekapeptidů CMVpp65, EBVBLCL účinně senzitizuje T buňky od stejných dárců proti CMV i EBV.

Protože vytvoření a testování EBV transformované B buněčné linie vhodné pro použití nebo jako antigen prezentující buňky vyžaduje 4-5 týdnů kultivace in vitro, je důležité, aby byl tento vzorek získán co nejdříve pro pacienty s rizikem CMV infekce. Protože pacienti, kteří dostávají HSCT od nepříbuzných nebo HLA odlišných dárců, jsou zvláště ohroženi závažnými infekcemi CMV v prvních 2–3 měsících po transplantaci, měl by být tento vzorek krve od dárce odebrán před darováním transplantace hematopoetických progenitorových buněk, kdykoli je to možné.

ii. Darování buď jednoho standardního leukaferézy o dvou objemech krve odebrané ve standardním antikoagulantu ACD. Pokud není možné odebrat leukaferézu od některého z dárců, bude přijatelná jednotka plné krve. Zařízení AICTF (Adoptive Immune Cell Therapy Facility vyrábějící buněčné produkty klinické kvality za podmínek GMP v MSKCC) však může být schopno generovat pouze omezený počet T buněk z jednotky krve. Tato krev je nutná pro izolaci T-buněk, které mají být senzibilizovány poolem CMVpp65 15-merů naložených na autologní EBVBLCL a propagovány in vitro. Kromě toho je nutné poskytnout autologní podpůrné buňky nezbytné pro udržení růstu T-buněk bez rizika stimulace růstu aloreaktivních T-buněk schopných indukovat GVHD.

Toto darování leukaferézy nebo jednotky krve bude získáno od nepříbuzných dárců HSCT alespoň 2 týdny po jejich darování HSCT nebo co nejdříve poté.

Aby se omezil počet odběrů krve nebo leukaferézy, které by byly vyžadovány od jakéhokoli dárce, bude každý dárce informován o následujících potenciálních aplikacích darovaných krvinek. Bílé krvinky obsažené v jedné leukaferéze jsou dostatečné k růstu dostatečného množství T-buněk k léčbě tří níže uvedených stavů u pacienta po transplantaci:

1. Použití buněk k vytvoření CMV-specifických T-buněk pro potenciální použití při léčbě pacienta, kterému dárce poskytl HSCT, pod MSKCC IRB # 05-065.

2. Použití části izolovaných buněk k vytvoření:

   1. imunitní T-buňky specifické pro jiný virus, jako je virus Epstein-Barrové, který může způsobit letální lymfomy u příjemců transplantátu, a
   2. imunitní T-buňky specifické pro protein zvaný WT-1, který je odlišně exprimován maligními krvinkami.

   Takové T-buňky by mohly být použity podle samostatných protokolů k léčbě onemocnění souvisejících s EBV (IRB 95-024) a/nebo k léčbě nebo prevenci recidivy leukémie (07-055) u pacienta, který dostává transplantaci dárcovských hematopoetických progenitorových buněk.

3. Darování imunitních T-buněk vytvořených od dárce, které nejsou použity nebo vyžadovány pacientem, pro kterého byly původně určeny, bance imunitních buněk, které budou skladovány a udržovány kryokonzervovány za podmínek GMP v rámci Adoptivní imunitní buněčné terapie Zařízení v MSKCC, Tyto uložené T-buňky, mohou být použity pro léčbu jiných pacientů s infekcemi/malignity CMV nebo EBV, které exprimují alely HLA sdílené dárcem.

Kromě těchto prospektivně nashromážděných dárců jsme od zahájení tohoto protokolu vytvořili více než 100 CMV-specifických T-buněk pro pacienty s vysokým rizikem infekce, z nichž mnohem méně pacientů vyžadovalo léčbu. Vzhledem k tomu, že tito pacienti jsou nyní po období rizika infekce CMV, jejich dárci budou osloveni se samostatným souhlasem, aby bylo umožněno použití jejich T buněk u jiných příjemců, než jsou primární pacienti, kterým původně buňky darovali.