Ensaio de células T de doadores sensibilizadas com pentadecapeptídeos da proteína CMV-PP65 para o tratamento de infecções por citomegalovírus (CMV) após transplantes alogênicos de células-tronco hematopoiéticas

Critério de inclusão:

Antes de receber tratamento, alguns pacientes podem ser submetidos a diagnóstico e/ou outros testes de seus tecidos, se disponíveis, para determinar se suas células infectadas por CMV provavelmente responderão ao tratamento com células T específicas para CMV. Alternativamente, amostras de sangue podem ser necessárias para testes de pesquisa para verificar se as células T específicas do CMV não contêm células que possam reagir contra o paciente. Esses pacientes assinarão um consentimento pré-tratamento separado. Se for determinado que um paciente se qualificará e poderá se beneficiar de infusões de CTLs CMV, ele/ela assinará o consentimento de tratamento padrão para MSKCC IRB # 05-065 e será inscrito e tratado no estudo, se todas as outras elegibilidade critérios são atendidos.

• Cada paciente deve satisfazer pelo menos um dos seguintes critérios:
• O paciente deve ter uma condição clinicamente documentada associada ao CMV (por exemplo, pneumonia intersticial, hepatite, retinite) ou
• O paciente deve ter evidência microbiológica de viremia ou invasão tecidual por CMV atestada por cultura viral, ou detecção de antigenemia de CMV ou detecção de níveis de DNA de CMV no sangue ou fluidos corporais consistentes com infecção por CMV.
• A infecção por CMV do paciente está progredindo clinicamente ou a viremia por CMV é persistente ou crescente (conforme evidenciado pela quantificação de antigenemia de CMV ou DNA de CMV no sangue) apesar da terapia de indução de duas semanas com drogas antivirais.
• O paciente desenvolveu viremia por CMV conforme atestado por cultura viral, ou detecção de antigenemia de CMV ou detecção de níveis de DNA de CMV no sangue ou fluidos corporais enquanto recebia doses profiláticas de medicamentos antivirais para prevenir infecção por CMV após o transplante. ou
• o paciente é incapaz de manter o tratamento com medicamentos antivirais devido a toxicidades associadas ao medicamento (por exemplo, mielossupressão [ANC < 1000 ul/ml sem suporte de GCSF] ou nefrotoxicidade [depuração de creatinina corrigida < ou igual a 60ml/min/1,73m2 ou creatinina >2 mg/dl]).
• Como as infecções por CMV são fatais e podem envolver os pulmões, fígado, trato gastrointestinal, sistema nervoso central e hematopoiético, e os medicamentos antivirais também podem comprometer a função renal e hematopoiética, as disfunções desses órgãos não afetarão a elegibilidade para este protocolo.

No entanto, para serem elegíveis, os pacientes devem atender aos seguintes critérios clínicos:

• Devem ter pressão arterial e circulação estáveis, não necessitando de suporte pressor.
• Eles devem ter função cardíaca adequada, conforme demonstrado por EKG e/ou por evidência ecocardiográfica.
• Eles devem ter uma expectativa de vida, mesmo que necessitem de suporte respiratório, de pelo menos 3 semanas.
• Não há restrições de idade para elegibilidade para este protocolo.

Critério de exclusão:

• Pacientes que requerem altas doses de glicocorticosteroides (>0,5 mg/kg de prednisona ou equivalente) como tratamento para doença aguda ativa (grau 2-4) do enxerto versus hospedeiro (GVHD) ou GVHD crônica.
• Pacientes moribundos.
• Pacientes com outras condições não relacionadas à infecção por CMV (por exemplo, sepse bacteriana descontrolada ou infecção fúngica invasiva) que também representam risco de vida e que impediriam a avaliação dos efeitos de uma infusão de células T.

Elegibilidade do Doador para Doação de Linfócitos Sanguíneos para Geração de

Células T específicas para CMV derivadas de doador:

Saúde adequada para doação conforme determinado pelas diretrizes institucionais (doador aparentado) ou NMDP (doador não aparentado). Os doadores normais serão avaliados quanto à evidência de sensibilização prévia ao CMV por sorologia para CMV. Eles também serão digitados para HLA A, B, C e DR. Para receptores de transplante alogênico de células progenitoras hematopoiéticas (HSCT), o doador de transplante de medula constituirá o doador de escolha, uma vez que essas células T crescerão e persistirão em um paciente que já foi enxertado com um transplante desse doador. No entanto, se o doador HSCT for soronegativo para CMV ou não estiver disponível (por exemplo, um transplante de sangue do cordão umbilical ou um doador não aparentado que ainda não doou células T para terapia adotiva), células T específicas para CMV geradas de um doador soropositivo compatível por pelo menos 2 alelos HLA compartilhados pelo paciente podem ser usados.

Os doadores normais que atendem a esses critérios e que consentem em doar sangue para a geração de células T específicas para CMV para fins terapêuticos adotivos receberão uma avaliação clínica detalhada, incluindo histórico médico, exame físico e testes sorológicos para doenças transmissíveis dentro de 1 semana após a doação incluindo hepBs Ag e anticorpo para hepatite C, HIV-1 e 2, HTLV-1 e 2, CMV (somente se previamente negativo), VDRL, WNV e Chagas Um doador HIV+ será rejeitado por motivos médicos. Os doadores devem ter valor de Hgb > 10 gm/dl e devem ser capazes de passar por uma única leucaférese de 3-6 unidades (preferível) ou uma única unidade de sangue para células T (para doadores pediátricos, não mais que 5 ml/kg em qualquer coleta de sangue).

Um doador potencial será informado sobre os propósitos deste estudo e seus requisitos. Se consentir, o doador será solicitado a fornecer duas amostras de sangue:

eu. Uma doação inicial de 25ml de sangue anticoagulado com heparina ou ACD. Este sangue é usado para estabelecer uma linhagem de células B transformada com a cepa de laboratório B95.8 de EBV. Esta linhagem de células B/EBV+ (EBVBLCL) será usada como uma célula apresentadora de antígeno. Quando carregado com o pool de pentadecapeptídeos CMVpp65, o EBVBLCL sensibiliza eficientemente as células T dos mesmos doadores contra o CMV, bem como contra o EBV.

Como o estabelecimento e teste de uma linhagem de células B transformadas por EBV adequada para uso ou como uma célula apresentadora de antígeno requer 4-5 semanas de cultura in vitro, é importante que esta amostra seja obtida o mais cedo possível para pacientes em risco de uma infecção por CMV. Como os pacientes que recebem HSCT de doadores não aparentados ou HLA díspares correm particularmente o risco de infecções graves por CMV nos primeiros 2-3 meses após o transplante, esta amostra de sangue deve ser obtida do doador antes da doação do transplante de células progenitoras hematopoiéticas, sempre que possível.

ii. Uma doação de uma única leucaferese padrão de 2 volumes de sangue coletada em anticoagulante ACD padrão. Se for impossível coletar uma leucaférese de alguns dos doadores, uma unidade de sangue total será aceitável. No entanto, o AICTF (Adoptive Immune Cell Therapy Facility que fabrica produtos celulares de grau clínico sob condições GMP em MSKCC) pode gerar apenas um número limitado de células T a partir de uma unidade de sangue. Este sangue é necessário para o isolamento das células T a serem sensibilizadas com o pool de CMVpp65 15-mers carregado no EBVBLCL autólogo e propagado in vitro. Além disso, é necessário fornecer células alimentadoras autólogas essenciais para sustentar o crescimento de células T sem o risco de estimular o crescimento de células T alorreativas capazes de induzir GVHD.

Esta doação de uma leucaférese ou uma unidade de sangue será obtida de doadores HSCT não aparentados pelo menos 2 semanas após a doação de um HSCT, ou assim que possível a partir de então.

A fim de limitar o número de doações de sangue ou leucaferese que seriam exigidas de qualquer doador, cada doador será informado sobre as seguintes aplicações potenciais das células sanguíneas doadas. Os glóbulos brancos contidos em uma leucaférese são suficientes para produzir células T suficientes para tratar as três condições abaixo em um paciente transplantado:

1. O uso de células para gerar células T específicas para CMV para uso potencial no tratamento do paciente para o qual o doador forneceu um HSCT, sob MSKCC IRB # 05-065.

2. O uso de uma fração das células isoladas para gerar:

   1. células T imunológicas específicas para outro vírus, como o vírus Epstein-Barr, que pode causar linfomas letais em receptores de transplante e
   2. células T imunes específicas para uma proteína chamada WT-1, que é expressa diferencialmente por células sanguíneas malignas.

   Essas células T podem ser usadas, sob protocolos separados, para tratar doenças associadas a EBV (IRB 95-024) e/ou para tratar ou prevenir a recorrência de leucemia (07-055) no paciente que recebe o transplante de células progenitoras hematopoiéticas do doador.

3. A doação das células T imunes geradas do doador que não são usadas ou exigidas pelo paciente a quem foram originalmente destinadas a um banco de células imunes que serão armazenadas e mantidas criopreservadas em condições GMP na Terapia Celular Imune Adotiva Instalação no MSKCC, essas células T armazenadas podem ser usadas para o tratamento de outros pacientes com infecções/malignidades por CMV ou EBV que expressam alelos HLA compartilhados pelo doador.

Além desses doadores acumulados prospectivamente, desde o início deste protocolo, geramos mais de 100 células T específicas para CMV para pacientes com alto risco de infecção, dos quais muito menos pacientes precisaram de tratamento. Uma vez que esses pacientes já passaram do período de risco para infecção por CMV, seus doadores serão abordados com um consentimento separado para permitir o uso de suas células T em receptores que não sejam os pacientes primários para quem inicialmente doaram células.