Badanie komórek T dawcy uczulonych pentadekapeptydami białka CMV-PP65 w leczeniu zakażeń wirusem cytomegalii (CMV) po allogenicznych przeszczepach hematopoetycznych komórek macierzystych

Kryteria przyjęcia:

Przed rozpoczęciem leczenia niektórzy pacjenci mogą zostać poddani diagnostyce i/lub innym badaniom tkanek, jeśli są dostępne, w celu ustalenia, czy ich komórki zakażone CMV prawdopodobnie zareagują na leczenie limfocytami T swoistymi dla CMV. Alternatywnie, próbki krwi mogą być wymagane do testów badawczych w celu upewnienia się, że limfocyty T swoiste dla CMV nie zawierają żadnych komórek, które mogłyby zareagować przeciwko pacjentowi. Pacjenci ci podpiszą odrębną zgodę przed zabiegiem. Jeśli zostanie ustalone, że pacjent kwalifikuje się i może odnieść korzyści z infuzji CMV CTL, podpisze on standardową zgodę na leczenie dla MSKCC IRB # 05-065 i zostanie włączony do badania i poddany leczeniu, jeśli wszystkie inne warunki kwalifikujące kryteria są spełnione.

• Każdy pacjent musi spełniać co najmniej jedno z poniższych kryteriów:
• Pacjent musi mieć klinicznie udokumentowany stan związany z CMV (np. śródmiąższowe zapalenie płuc, zapalenie wątroby, zapalenie siatkówki) lub
• Pacjent musi mieć mikrobiologiczne dowody wiremii CMV lub inwazji tkanek, potwierdzone przez hodowlę wirusa lub wykrycie antygenu CMV lub wykrycie poziomu CMV DNA we krwi lub płynach ustrojowych odpowiadające zakażeniu CMV.
• Zakażenie CMV pacjenta postępuje klinicznie lub wiremia CMV utrzymuje się lub wzrasta (o czym świadczy ilościowe oznaczenie antygenu CMV lub DNA CMV we krwi) pomimo dwutygodniowej terapii indukcyjnej lekami przeciwwirusowymi.
• U pacjenta rozwinęła się wiremia CMV, co potwierdzono posiewem wirusa lub wykryciem antygenu CMV lub wykryciem poziomu CMV DNA we krwi lub płynach ustrojowych podczas otrzymywania profilaktycznych dawek leków przeciwwirusowych, aby zapobiec zakażeniu CMV po przeszczepie. lub
• pacjent nie jest w stanie kontynuować leczenia lekami przeciwwirusowymi z powodu toksyczności związanej z lekami (np. mielosupresja [ANC < 1000 ul/ml bez wspomagania GCSF] lub nefrotoksyczność [skorygowany klirens kreatyniny < lub równy 60ml/min/1,73m2 lub kreatynina >2 mg/dl]).
• Ponieważ zakażenia CMV zagrażają życiu i mogą obejmować płuca, wątrobę, przewód pokarmowy, układ krwiotwórczy i ośrodkowy układ nerwowy, a leki przeciwwirusowe mogą również upośledzać czynność nerek i układu krwiotwórczego, dysfunkcje tych narządów nie wpływają na kwalifikację do tego protokołu.

Jednak aby się zakwalifikować, pacjenci powinni spełniać następujące kryteria kliniczne:

• Muszą mieć stabilne ciśnienie krwi i krążenie, niewymagające wspomagania presyjnego.
• Powinni mieć odpowiednią czynność serca, co wykazano za pomocą EKG i/lub dowodów echokardiograficznych.
• Powinni mieć oczekiwaną długość życia, nawet jeśli wymagają respiratora, co najmniej 3 tygodnie.
• Nie ma żadnych ograniczeń wiekowych co do kwalifikowalności do tego protokołu.

Kryteria wyłączenia:

• Pacjenci wymagający dużych dawek glikokortykosteroidów (>0,5 mg/kg prednizonu lub jego odpowiednika) w leczeniu czynnej (stopień 2-4) ostrej choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD) lub przewlekłej GVHD.
• Pacjenci, którzy są konający.
• Pacjenci z innymi schorzeniami niezwiązanymi z zakażeniem CMV (np. niekontrolowana posocznica bakteryjna lub inwazyjna infekcja grzybicza), które również zagrażają życiu i które wykluczają ocenę skutków infuzji limfocytów T.

Kwalifikacja dawcy do oddania limfocytów krwi do generacji

Komórki T swoiste dla CMV pochodzące od dawcy:

Odpowiedni stan zdrowia do oddania, zgodnie z wytycznymi instytucji (dawca spokrewniony) lub NMDP (dawca niespokrewniony). Normalni dawcy będą oceniani pod kątem dowodów wcześniejszego uczulenia na CMV za pomocą serologii CMV. Zostaną również typowani pod kątem HLA A, B, C i DR. W przypadku biorców allogenicznego przeszczepu hematopoetycznych komórek progenitorowych (HSCT), dawca szpiku kostnego będzie dawcą z wyboru, ponieważ te komórki T będą rosły i utrzymywały się u pacjenta, który już otrzymał przeszczep od tego dawcy. Jeśli jednak dawca HSCT jest seronegatywny w kierunku CMV lub niedostępny (np. przeszczep krwi pępowinowej lub dawca niespokrewniony, który nie oddał jeszcze limfocytów T do terapii adopcyjnej), limfocyty T specyficzne względem CMV wygenerowane od seropozytywnego dawcy dopasowanego co najmniej Można zastosować 2 allele HLA wspólne dla pacjenta.

Zwykli dawcy spełniający te kryteria, którzy wyrażą zgodę na oddanie krwi w celu wytworzenia komórek T specyficznych dla CMV do celów terapii adoptywnej, otrzymają szczegółową ocenę kliniczną, w tym wywiad lekarski, badanie fizykalne i testy serologiczne w kierunku chorób zakaźnych w ciągu 1 tygodnia od pobrania w tym hepBs Ag i przeciwciała przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C, HIV-1 i 2, HTLV-1 i 2, CMV (tylko jeśli wcześniej był ujemny), VDRL, WNV i Chagas Dawca HIV+ zostanie odrzucony z powodów medycznych. Dawcy muszą mieć wartość Hgb > 10 gm/dl i muszą być zdolni do poddania się pojedynczej leukaferezie 3-6 jednostek (preferowane) lub jednej jednostki krwi dla limfocytów T (dla dawców pediatrycznych, nie więcej niż 5 ml/kg w dowolnym momencie) rysunek krwi).

Potencjalny dawca zostanie poinformowany o celach tego badania i jego wymaganiach. Jeśli wyrazi zgodę, dawca zostanie poproszony o dostarczenie dwóch próbek krwi:

ja. Wstępne oddanie 25 ml krwi antykoagulowanej heparyną lub ACD. Krew tę stosuje się do ustanowienia linii komórek B transformowanej laboratoryjnym szczepem EBV B95.8. Ta linia komórkowa EBV+ B/ (EBVBLCL) zostanie użyta jako komórka prezentująca antygen. Po załadowaniu pulą pentadekapeptydów CMVpp65, EBVBLCL skutecznie uwrażliwia komórki T od tych samych dawców na CMV, jak również EBV.

Ponieważ ustanowienie i zbadanie linii komórek B transformowanych EBV odpowiednich do użycia lub jako komórek prezentujących antygen wymaga 4-5 tygodni hodowli in vitro, ważne jest, aby tę próbkę uzyskać jak najwcześniej u pacjentów z grupy ryzyka Zakażenie CMV. Ponieważ pacjenci otrzymujący HSCT od dawców niespokrewnionych lub od dawców o różnych genach HLA są szczególnie narażeni na ciężkie zakażenia wirusem cytomegalii w ciągu pierwszych 2-3 miesięcy po przeszczepie, taką próbkę krwi należy pobrać od dawcy przed oddaniem krwiotwórczych komórek progenitorowych, gdy tylko jest to możliwe.

II. Dawstwo pojedynczej standardowej leukaferezy o objętości 2 krwi pobranej na standardowy antykoagulant ACD. W przypadku braku możliwości pobrania leukaferezy od części dawców dopuszczalna jest jednostka krwi pełnej. Jednak AICTF (Zakład Adopcyjnej Terapii Odpornościowej produkujący produkty komórkowe klasy klinicznej w warunkach GMP w MSKCC) może być w stanie wygenerować tylko ograniczoną liczbę limfocytów T z jednostki krwi. Ta krew jest wymagana do izolacji komórek T, które mają być uczulone pulą 15-merów CMVpp65 załadowanych na autologiczny EBVBLCL i namnażanych in vitro. Ponadto wymagane jest zapewnienie autologicznych komórek odżywczych niezbędnych do podtrzymania wzrostu komórek T bez ryzyka stymulowania wzrostu alloreaktywnych komórek T zdolnych do indukowania GVHD.

Ta donacja leukaferezy lub jednostka krwi zostanie uzyskana od niespokrewnionych dawców HSCT co najmniej 2 tygodnie po oddaniu HSCT lub tak szybko, jak to możliwe.

W celu ograniczenia liczby donacji krwi lub leukaferezy, które byłyby wymagane od każdego dawcy, każdy dawca zostanie poinformowany o następujących potencjalnych zastosowaniach oddanych krwinek. Liczba białych krwinek zawarta w jednej leukaferezie wystarcza do wyhodowania wystarczającej liczby limfocytów T do leczenia trzech poniższych schorzeń u pacjenta po przeszczepie:

1. Zastosowanie komórek do wytwarzania komórek T specyficznych dla CMV do potencjalnego zastosowania w leczeniu pacjenta, któremu dawca wykonał HSCT, zgodnie z MSKCC IRB # 05-065.

2. Wykorzystanie frakcji wyizolowanych komórek do wytworzenia:

   1. limfocyty T odporności swoiste dla innego wirusa, takiego jak wirus Epsteina-Barra, który może powodować śmiertelne chłoniaki u biorców przeszczepów, oraz
   2. limfocyty T układu odpornościowego swoiste dla białka zwanego WT-1, którego ekspresja jest różna w złośliwych krwinkach.

   Takie limfocyty T można stosować, zgodnie z odrębnymi protokołami, do leczenia chorób związanych z EBV (IRB 95-024) i/lub do leczenia lub zapobiegania nawrotom białaczki (07-055) u pacjenta otrzymującego przeszczep hematopoetycznych komórek progenitorowych dawcy.

3. Oddanie komórek odpornościowych uzyskanych od dawcy, które nie są używane lub wymagane przez pacjenta, dla którego były pierwotnie przeznaczone, do banku komórek odpornościowych, które będą przechowywane i utrzymywane w warunkach kriokonserwacji zgodnie z GMP w ramach terapii adoptywnej komórkami odpornościowymi Placówka w MSKCC, te przechowywane komórki T, mogą być wykorzystywane do leczenia innych pacjentów z infekcjami/nowotworami CMV lub EBV, które wykazują ekspresję alleli HLA wspólnych dla dawcy.

Oprócz tych potencjalnych dawców, od czasu rozpoczęcia tego protokołu wygenerowaliśmy ponad 100 komórek T specyficznych dla CMV dla pacjentów z wysokim ryzykiem infekcji, z których znacznie mniej pacjentów wymagało leczenia. Ponieważ ci pacjenci są teraz poza okresem ryzyka zakażenia CMV, ich dawcy zostaną poproszeni o oddzielną zgodę, aby umożliwić użycie ich limfocytów T u biorców innych niż pacjenci pierwotni, dla których początkowo oddali komórki.