Diagnóza trizomie chromozomu 21 pomocí sekvenování s vysokým výkonem (SEQ21)

Odůvodnění výzkumu:

Trizomie 21 je nejčastější příčinou handicapu genetického původu s incidencí 1,3/1 000 porodů, která se zvyšuje s věkem matky. Bylo vyvinuto několik strategií prenatálního screeningu. Vysoký úřad zdravotnictví nedávno doporučil navrhnout těhotným ženám kombinovaný screening v 1. trimestru, realizovaný mezi 11+0 a 13+6 týdnem amenorey, sdružující měření translucence NUCALE a dávkování v mateřském séru: PAPP-A (Pregnancy Associated Plasma Protein A) a βhCG (volný β lidský choriový gonadotropin 1. trimestru). Senzitivita těchto screeningových testů je však asi 80 % pro 5 % pozitivních falešných. Diagnóza aneuploidie je pak stanovena na populaci klasifikované jako vysoce rizikové podle karyotypu plodu (vyžadující invazivní postup: biopsii trofoblastu nebo amniocentézu). Pozitivní screening zvyšuje mateřskou a lékařskou úzkost. Nevhodná kombinace testů je navíc příčinou mnoha zbytečných invazivních výkonů (národní míra amniocentézy 11 %) s rizikem ztrát plodu (0,5 v 1 %). Tato invaze invazivních výkonů vede k tolika ztrátám nepostižených dětí jako trizomických dětí a ke špatně známé mateřské morbiditě.

Několik studií ukázalo, že 10 % volné DNA nalezené v první čtvrtině těhotenství v mateřské plazmě je fetálního původu a že tato DNA je specifická pro fetální jadernou DNA současného těhotenství. Tím se otevřela cesta k možné neinvazivní prenatální diagnostice fetální aneuploidie, která v posledních 10 letech kolidovala s výkony limitovanými izolací a sekvenováním fetální DNA v mateřské plazmě. Nová technika analýzy širokopásmovým sekvenováním DNA cirkulující v mateřské krvi pro diagnostiku nejčastějšího aneuploidu, jehož trizomie 21 byla vrácena (uvedeno). Vysokovýkonné sekvenování veškeré DNA cirkulující v mateřské krvi, následné čtení a identifikace všech sekvencí chromozomů umožňuje analyzovat množství DNA pocházející z nadpočetného chromozomu, bez nutnosti rozlišovat mateřskou a fetální DNA. Na základě velmi nedávných prací 10 tento přebytek sekvencí vyplývajících specificky z fetálního nadpočetného chromozomu 21 umožňuje úplné rozlišení mezi trizomií 21 a dizomií 21. Tato studie však analyzovala pouze 9 případů trizomie 21 a odběry mateřské krve byly provedeny po amniocentéze nebo choriocentéze, což mohlo uměle zvýšit množství cirkulující fetální DNA.

Cíle:

Prokažte, že vysokovýkonné sekvenování fetální DNA v mateřské krvi by mohlo umožnit úplné rozlišení mezi matkami trizomického plodu 21 nebo plodu DISOMIQUE 21 z první čtvrtiny těhotenství, a získat tak spolehlivou alternativu v invazivním postup.

Metoda Dvě veřejná centra prenatálního screeningu byla zřízena, aby konkrétně odpovídala na doporučení Vysokého úřadu pro zdraví a měla kapacitu provést 20 000 screeningů ročně. Všechny ženy s vysokým rizikem (> 1/250) aneuploidie a kandidátky na invazivní zákrok uvidí návrh na účast ve studii. Zařazeným pacientkám bude před invazivním testem odebrán vzorek mateřské krve. Tento odběr bude pozastaven při -80 °C po centrifugaci podle doporučeného protokolu. Na konci zařazení bude provedena technika analýzy cirkulující DNA, poté naslepo laboratoří u všech diagnostikovaných případů (obvyklým invazivním vyšetřením, nebo v závěru těhotenství) trizomie 21 a u kontroly reprezentativní všech strašidlo úrovní rizika. Bude realizována studie reprodukovatelnosti kvantifikace DNA chromozomu 21.

Počet předmětů:

plánujeme zahrnout 75 případů trizomie 21 a 150 kontrolních případů s normálním karyotypem, což umožňuje detekovat 99,9 % senzibilitu a 99,99 % specificitu se silou alespoň 95 %.

Délka studia:

tyto cíle jsou realizovatelné za dva roky na základě počtu realizovaných invazivních odběrů jak v centru, tak již realizované studie

Etické aspekty: výzkum dat a biologického sběru. Na základě odhadovaného testu nebude přijato žádné individuální lékařské rozhodnutí.

Perspektivy:

tato nová technika, pokud je zobecnitelná, by umožnila omezit počet výkonů invazivní diagnostiky (amniocentéza a choriocentéza), které obsahují významné riziko závažných mateřských a fetálních komplikací, a zároveň optimalizovat kapacity tohoto screeningu.