Trisomie van chromosoom 21 Diagnose door High Output Sequencing (SEQ21)

Verantwoording van het onderzoek:

Trisomie 21 is de meest voorkomende oorzaak van een handicap van genetische oorsprong met een incidentie van 1,3/1 000 geboorten, die toeneemt met de leeftijd van de moeder. Er zijn verschillende strategieën voor prenatale screening ontwikkeld. De Hoge Gezondheidsautoriteit heeft onlangs aanbevolen om aan zwangere vrouwen een gecombineerde screening in het 1e trimester voor te stellen, uitgevoerd tussen 11+0 en 13+6 weken amenorroe, waarbij de maat van de NUCALE-translucentie en de dosering in maternaal serum worden gecombineerd: PAPP-A (Pregnancy Associated Plasma-eiwit A) en βhCG (vrij β humaan chorion 1e trimester gonadotrofine). De gevoeligheid van deze screeningstests is echter ongeveer 80% voor 5% positief vals. De diagnose aneuploïdie wordt vervolgens gesteld bij een populatie die is geclassificeerd als een hoog risico, door middel van een foetaal karyotype (waarvoor een invasieve procedure vereist is: biopsie van trofoblast of vruchtwaterpunctie). Een positieve screening verhoogt de maternale en medische angst. Bovendien ligt de ongepaste combinatie van de tests aan de basis van talrijke nutteloze invasieve procedures (nationaal vruchtwaterpunctiepercentage van 11 %), met het risico op verlies van de foetus (0,5 op 1 %). Deze inflatie van invasieve procedures leidt tot zoveel verliezen van niet-aangedane kinderen als kinderen met trisomie en tot een slecht bekende maternale morbiditeit.

Verschillende onderzoeken toonden aan dat 10 % van het vrije DNA dat uit het eerste kwartier van de zwangerschap in het maternale plasma wordt aangetroffen, van foetale oorsprong is en dat dit DNA specifiek is voor het foetale kern-DNA van de huidige zwangerschap. Dit opende de weg naar een mogelijke niet-invasieve antenatale diagnose van de foetale aneuploïdie die gedurende de laatste 10 jaar in botsing kwam met de prestaties beperkt door de isolatie en door de sequentiebepaling van het foetale DNA in het maternale plasma. Een nieuwe analysetechniek door breedbandsequencing van het DNA dat circuleert in het bloed van de moeder voor de diagnose van de meest voorkomende aneuploïde waarvan de trisomie 21 is teruggebracht (gerapporteerd). De high-output shotgun-sequencing van al het DNA dat in het bloed van de moeder circuleert, en vervolgens het aflezen en identificeren van alle chromosoomsequenties maakt het mogelijk om de hoeveelheid DNA te analyseren die voortvloeit uit het overtollige chromosoom, zonder de noodzaak om moederlijk en foetaal DNA te onderscheiden. Op basis van zeer recente werken 10, maakt deze overmaat aan sequenties die specifiek het gevolg zijn van het overtollige foetale chromosoom 21 een volledige discriminatie mogelijk tussen trisomie 21 en disomie 21. Deze studie analyseerde echter slechts 9 gevallen van trisomie 21 en de bemonstering van maternaal bloed werd gerealiseerd na de vruchtwaterpunctie of de choriocenteses, wat de hoeveelheid circulerend foetaal DNA kunstmatig had kunnen verhogen.

Doelstellingen :

Aantonen dat de High output shotgun-sequencing van het foetale DNA in het maternaal bloed een volledig onderscheid kan maken tussen de moeders van een trisomische foetus 21 of een DISOMIQUE foetus 21 vanaf het eerste kwartaal van de zwangerschap, en zo een betrouwbaar alternatief voor invasieve procedure.

Methode Twee openbare centra voor prenatale screening werden opgericht om specifiek te beantwoorden aan de aanbevelingen van de Hoge Gezondheidsautoriteit en hebben de capaciteit om 20 000 screenings per jaar uit te voeren. Alle vrouwen met een hoog risico (> 1/250) op aneuploïdie en de kandidaten voor een invasieve procedure, zullen deelname aan de studie zien voorstellen. De geïncludeerde patiënten zullen vóór de invasieve test een bloedmonster van de moeder krijgen. Deze afname wordt in de wacht gezet bij -80°C na centrifugeren volgens het aanbevolen protocol. Aan het einde van de inclusie zal de techniek van analyse van het circulerend DNA worden uitgevoerd en vervolgens door het laboratorium blind worden uitgevoerd op alle gediagnosticeerde gevallen (door gewoon invasief onderzoek of aan het einde van de zwangerschap) van trisomie 21 en op controle representatief voor alle het spook van de risiconiveaus. Een studie naar de reproduceerbaarheid van de kwantificering van het DNA van het chromosoom 21 zal gerealiseerd worden.

Aantal onderwerpen:

we zijn van plan om 75 gevallen van trisomie 21 en 150 controlegevallen met normaal karyotype op te nemen, wat het mogelijk maakt om een ​​gevoeligheid van 99,9% en een specificiteit van 99,99% te detecteren met een vermogen van ten minste 95%.

Duur van de studie:

deze doelstellingen zijn haalbaar in twee jaar op basis van het aantal gerealiseerde invasieve innames in zowel het centrum als een reeds gerealiseerde studie

Ethische aspecten: onderzoek naar gegevens en biologische verzameling. Er zal geen individuele medische beslissing worden genomen op basis van de geschatte test.

Perspectieven:

deze nieuwe techniek, als ze generaliseerbaar is, zou het mogelijk maken om het aantal invasieve diagnoseprocedures (vruchtwaterpunctie en choriocentese) die een aanzienlijk risico op ernstige maternale en foetale complicaties inhouden, te beperken, terwijl de capaciteiten van deze screening worden geoptimaliseerd.