Diagnoza trisomii chromosomu 21 za pomocą sekwencjonowania o wysokiej wydajności (SEQ21)

Uzasadnienie badania:

Trisomia 21 jest najczęstszą przyczyną niepełnosprawności o podłożu genetycznym z częstością 1,3/1000 urodzeń, która wzrasta wraz z wiekiem matki. Opracowano kilka strategii badań prenatalnych. Wysoka Władza ds. Zdrowia zaleciła niedawno kobietom w ciąży łączenie badań przesiewowych w pierwszym trymestrze ciąży, przeprowadzanych między 11+0 a 13+6 tygodniem braku miesiączki, łączących pomiar przezierności NUCALE i dawkowanie w surowicy matki: PAPP-A (Pregnancy Associated Białko osocza A) i βhCG (wolna β ludzka gonadotropina kosmówkowa pierwszego trymestru). Jednak czułość tych testów przesiewowych wynosi około 80% dla 5% pozytywnych wyników fałszywych. Rozpoznanie aneuploidii ustala się wtedy na podstawie kariotypu płodu w populacji sklasyfikowanej w grupie wysokiego ryzyka (wymagającej inwazyjnego zabiegu: biopsji trofoblastu lub amniopunkcji). Pozytywny wynik badania przesiewowego zwiększa niepokój matki i lekarza. Ponadto niewłaściwe połączenie testów jest przyczyną wielu bezużytecznych procedur inwazyjnych (krajowy wskaźnik amniopunkcji 11 %), z ryzykiem utraty płodu (0,5 w 1 %). Ta inflacja procedur inwazyjnych prowadzi do tak wielu strat dzieci zdrowych, jak dzieci z trisomią i do źle znanej zachorowalności matek.

W kilku badaniach wykazano, że 10% wolnego DNA znalezionego w osoczu matki z pierwszego kwartału ciąży jest pochodzenia płodowego i że DNA to jest swoiste dla jądrowego DNA płodu obecnej ciąży. Otworzyło to drogę do możliwej nieinwazyjnej diagnostyki prenatalnej aneuploidii płodu, co kolidowało w ciągu ostatnich 10 lat z możliwościami ograniczonymi izolacją i sekwencjonowaniem płodowego DNA w osoczu matki. Nowa technika analizy szerokopasmowego sekwencjonowania DNA krążącego we krwi matki do diagnozy najczęstszego aneuploidu, którego trisomia 21 została przywrócona (zgłoszona). Wysokowydajne sekwencjonowanie typu shotgun całego DNA krążącego we krwi matki, a następnie odczyt i identyfikacja wszystkich sekwencji chromosomów pozwala na analizę ilości DNA powstałego z chromosomu nadliczbowego, bez konieczności różnicowania DNA matki i płodu. Na podstawie bardzo niedawnych prac 10, ten nadmiar sekwencji wynikających konkretnie z nadliczbowego chromosomu 21 płodu pozwala na całkowite rozróżnienie między trisomią 21 a disomią 21. Jednak w badaniu tym przeanalizowano tylko 9 przypadków trisomii 21, a pobranie krwi matki wykonano po amniopunkcji lub nakłuciu kosmówki, co mogło sztucznie zwiększyć ilość krążącego płodowego DNA.

Cele:

Wykazać, że wysokowydajne sekwencjonowanie DNA płodu we krwi matki może pozwolić na całkowite rozróżnienie między matkami płodu trisomicznego 21 lub płodu DISOMIQUE 21 od pierwszej ćwiartki ciąży, a tym samym uzyskać wiarygodną alternatywę w leczeniu inwazyjnym procedura.

Metoda Utworzono dwa publiczne centra badań prenatalnych, które odpowiadają konkretnie na zalecenia Wysokiej Władzy ds. Zdrowia i są w stanie przeprowadzić 20 000 badań przesiewowych rocznie. Wszystkie kobiety z dużym ryzykiem (> 1/250) aneuploidii oraz kandydatki do zabiegu inwazyjnego zostaną zasugerowane do udziału w badaniu. Pacjenci objęci badaniem otrzymają próbkę krwi matki przed badaniem inwazyjnym. Pobieranie zostanie wstrzymane w temperaturze -80°C po odwirowaniu zgodnie z zalecanym protokołem. Pod koniec włączenia technika analizy krążącego DNA zostanie zrealizowana następnie na ślepo przez laboratorium na wszystkich zdiagnozowanych przypadkach (poprzez zwykłe badanie inwazyjne lub przy zakończeniu ciąży) trisomii 21 i na reprezentatywnej kontroli wszystkich widmo poziomów ryzyka. Zrealizowane zostanie badanie powtarzalności oznaczania ilościowego DNA chromosomu 21.

Liczba przedmiotów:

planujemy objąć 75 przypadków trisomii 21 i 150 przypadków kontrolnych z prawidłowym kariotypem, co pozwala na wykrycie 99,9% czułości i 99,99% swoistości z mocą co najmniej 95%.

Czas trwania badania:

cele te są wykonalne w ciągu dwóch lat na podstawie liczby pobrań inwazyjnych zrealizowanych zarówno w ośrodku, jak i już zrealizowanego badania

Aspekty etyczne: badania nad danymi i zbiór biologiczny. Żadna indywidualna decyzja medyczna nie zostanie podjęta na podstawie szacunkowego testu.

Perspektywy:

ta nowa technika, jeśli da się ją uogólnić, pozwoliłaby ograniczyć liczbę procedur diagnostyki inwazyjnej (amniopunkcja i choriopunkcja), które niosą ze sobą znaczne ryzyko poważnych powikłań matczynych i płodowych, przy jednoczesnej optymalizacji możliwości tego skriningu.