Trissomia do cromossomo 21 Diagnóstico por sequenciamento de alto rendimento (SEQ21)

Justificativa da pesquisa:

A trissomia 21 é a causa mais frequente de handicap de origem genética com uma incidência de 1,3/1 000 nascimentos que aumenta com a idade materna. Várias estratégias de triagem pré-natal foram desenvolvidas. A Alta Autoridade de Saúde recomendou recentemente propor às grávidas um rastreio combinado do 1º trimestre, realizado entre as 11+0 e as 13+6 semanas de amenorreia, associando a medida da translucidez NUCALE e a dosagem no soro materno: PAPP-A (Pregnancy Associated Proteína Plasmática A) e βhCG (Gonadotrofina Coriônica Humana β livre do 1º trimestre). No entanto, a sensibilidade desses testes de triagem é de cerca de 80% para 5% de falso positivo. O diagnóstico de aneuploidia é então estabelecido em uma população classificada de alto risco, por um cariótipo fetal (requer um procedimento invasivo: biópsia de trofoblasto ou amniocentese). Um rastreio positivo aumenta a ansiedade materna e médica. Além disso, a combinação inadequada dos testes está na origem de inúmeros procedimentos invasivos inúteis (taxa nacional de amniocentese de 11%), com risco de perdas fetais (0,5 em 1%). Essa inflação de procedimentos invasivos leva a tantas perdas de crianças não afetadas como crianças trissômicas e a uma morbidade materna pouco conhecida.

Vários estudos mostraram que 10% do DNA livre encontrado no primeiro trimestre da gravidez no plasma materno é de origem fetal e que esse DNA é específico do DNA nuclear fetal da gravidez atual. Isso abriu caminho para um possível diagnóstico pré-natal não invasivo da aneuploidia fetal que colidiu durante os últimos 10 anos com as performances limitadas pelo isolamento e pelo sequenciamento do DNA fetal no plasma materno. Uma nova técnica de análise por sequenciamento de banda larga do DNA circulante no sangue materno para o diagnóstico do aneuploide mais frequente cuja trissomia 21 foi trazida (relatado). O sequenciamento shotgun de alto rendimento de todo o DNA circulante no sangue materno, em seguida a leitura e identificação de todas as sequências cromossômicas permite analisar a quantidade de DNA resultante do cromossomo supranumerário, sem necessidade de diferenciar DNA materno e fetal. Com base em trabalhos muito recentes 10, esse excesso de sequências resultantes especificamente do cromossomo 21 supranumerário fetal permite uma discriminação completa entre trissomia 21 e dissomia 21. Entretanto, este estudo analisou apenas 9 casos de trissomia 21 e as coletas de sangue materno foram realizadas após amniocentese ou coriocentese, o que poderia ter aumentado artificialmente a quantidade de DNA fetal circulante.

Objetivos :

Demonstrar que o sequenciamento shotgun de alto rendimento do DNA fetal no sangue materno poderia permitir uma discriminação completa entre as mães de um feto trissômico 21 ou um feto DISOMIQUE 21 desde o primeiro trimestre da gravidez, e assim obter uma alternativa confiável em métodos invasivos procedimento.

Método Dois centros públicos de rastreio pré-natal foram criados para responder especificamente às recomendações da Alta Autoridade de Saúde e têm capacidade para realizar 20 000 rastreios por ano. Todas as mulheres com alto risco (> 1/250) de aneuploidia e candidatas a um procedimento invasivo, serão sugeridas para participar do estudo. Os pacientes incluídos terão uma amostra de sangue materno antes do teste invasivo. Esta tomada será suspensa em -80°C após a centrifugação seguindo o protocolo recomendado. Ao final da inclusão, será realizada a técnica de análise do DNA circulante então cega pelo laboratório em todos os casos diagnosticados (por exame invasivo usual, ou na conclusão da gravidez) de trissomia 21 e em controle representativo de todos o espectro dos níveis de risco. Será realizado um estudo de reprodutibilidade da quantificação do DNA do cromossomo 21.

Número de assuntos:

pretendemos incluir 75 casos de trissomia 21 e 150 casos de controlo com cariótipo normal, o que permite detectar uma sensibilidade de 99,9 % e uma especificidade de 99,99 % com um poder de pelo menos 95 %.

Duração do estudo:

esses objetivos são praticáveis ​​em dois anos com base no número de tomadas invasivas realizadas em ambos os centros e em um estudo já realizado

Aspectos éticos: pesquisa de dados e coleta biológica. Nenhuma decisão médica individual será tomada de acordo com o teste estimado.

Perspectivas:

esta nova técnica, se for generalizável, permitiria limitar o número de procedimentos de diagnóstico invasivo (amniocentese e coriocentese) que encerram um risco significativo de graves complicações maternas e fetais, otimizando ao mesmo tempo as capacidades deste rastreio.