Diagnóstico de trisomía del cromosoma 21 mediante secuenciación de alto rendimiento (SEQ21)

Justificación de la investigación:

La trisomía 21 es la causa más frecuente de discapacidad de origen genético con una incidencia de 1,3/1 000 nacimientos que aumenta con la edad materna. Se desarrollaron varias estrategias de tamizaje prenatal. La Alta Autoridad de Salud recomendó recientemente proponer a las gestantes un cribado combinado del 1er trimestre, realizado entre las 11+0 y las 13+6 semanas de amenorrea, asociando medida de la translucidez NUCALE y dosificación en suero materno: PAPP-A (Pregnancy Associated Plasma Protein A) y βhCG (gonadotrofina coriónica humana β libre del primer trimestre). Sin embargo, la sensibilidad de estas pruebas de cribado es de un 80 % para un 5 % de falsos positivos. El diagnóstico de aneuploidía se establece entonces en una población clasificada de alto riesgo, por un cariotipo fetal (que requiere un procedimiento invasivo: biopsia de trofoblasto o amniocentesis). Un cribado positivo aumenta la ansiedad materna y médica. Además, la combinación inadecuada de las pruebas está en el origen de numerosos procedimientos invasivos inútiles (tasa nacional de amniocentesis del 11 %), con riesgo de pérdidas fetales (0,5 en 1 %). Esta inflación de procedimientos invasivos conduce a tantas pérdidas de niños no afectados como trisómicos ya una morbilidad materna mal conocida.

Varios estudios demostraron que el 10 % del ADN libre encontrado a partir del primer trimestre del embarazo en el plasma materno es de origen fetal y que este ADN es específico del ADN nuclear fetal del embarazo actual. Esto abrió el camino a un posible diagnóstico prenatal no invasivo de la aneuploidía fetal que chocó durante los últimos 10 años con las actuaciones limitadas por el aislamiento y por la secuenciación del ADN fetal en el plasma materno. Se reportó una nueva técnica de análisis por secuenciación de banda ancha del ADN circulante en la sangre materna para el diagnóstico de las aneuploides más frecuentes cuya trisomía 21. La secuenciación shotgun de alto rendimiento de todo el ADN que circula en la sangre materna, luego la lectura e identificación de todas las secuencias cromosómicas permite analizar la cantidad de ADN resultante del cromosoma supernumerario, sin necesidad de diferenciar el ADN materno y fetal. Sobre la base de trabajos muy recientes 10, este exceso de secuencias resultantes específicamente del supernumerario fetal del cromosoma 21 permite una discriminación completa entre trisomía 21 y disomía 21. Sin embargo, este estudio analizó sólo 9 casos de trisomía 21 y la toma de muestras de sangre materna se realizó después de la amniocentesis o la coriocentesis, lo que pudo haber aumentado artificialmente la cantidad de ADN fetal circulante.

Objetivos :

Demostrar que la secuenciación shotgun de alto rendimiento del ADN fetal en la sangre materna podría permitir una discriminación completa entre las madres de un feto trisómico 21 o un feto DISOMIQUE 21 del primer trimestre del embarazo, y así obtener una alternativa confiable en invasiva procedimiento.

Método Se establecieron dos centros públicos de tamizaje prenatal para responder específicamente a las recomendaciones de la Alta Autoridad de Salud y con capacidad para realizar 20 000 actos de tamizaje al año. Todas las mujeres que presenten un alto riesgo (> 1/250) de aneuploidía y las candidatas a un procedimiento invasivo, se verán sugeridas para participar en el estudio. A las pacientes incluidas se les tomará una muestra de sangre materna antes de la prueba invasiva. Esta toma se pondrá en espera a -80°C después de la centrifugación siguiendo el protocolo recomendado. Al final de la inclusión, la técnica de análisis del ADN circulante será realizada entonces a ciegas por el laboratorio sobre todos los casos diagnosticados (por examen invasivo habitual, o al final del embarazo) de trisomía 21 y sobre controles representativos de todos el espectro de los niveles de riesgo. Se realizará un estudio de reproducibilidad de la cuantificación del ADN del cromosoma 21.

Número de asignaturas:

planeamos incluir 75 casos de trisomía 21 y 150 casos control con cariotipo normal, lo que permite detectar una sensibilidad del 99,9 % y una especificidad del 99,99 % con una potencia de al menos el 95 %.

Duración del estudio:

estos objetivos son realizables en dos años en base al número de tomas invasivas realizadas en ambos centro y un estudio ya realizado

Aspectos Éticos: investigación sobre datos y recolección biológica. No se tomará ninguna decisión médica individual de acuerdo con la prueba estimada.

Perspectivas:

esta nueva técnica, si es generalizable, permitiría limitar el número de procedimientos de diagnóstico invasivo (amniocentesis y coriocentesis) que contienen un riesgo significativo de complicaciones maternas y fetales graves, al tiempo que optimizaría las capacidades de este cribado.