Diagnosi di trisomia del cromosoma 21 mediante sequenziamento ad alto rendimento (SEQ21)

Giustificazione della ricerca:

La trisomia 21 è la causa più frequente di handicap di origine genetica con un'incidenza di 1,3/1000 nati che aumenta con l'età materna. Sono state sviluppate diverse strategie di screening prenatale. L'Alta Autorità di Sanità ha recentemente raccomandato di proporre alle gestanti uno screening combinato del 1° trimestre, realizzato tra le 11+0 e le 13+6 settimane di amenorrea, associando la misura della traslucenza NUCALE e il dosaggio nel siero materno: PAPP-A (Pregnancy Associated Plasma Protein A) e βhCG (gonadotropina corionica umana β libera del 1° trimestre). Tuttavia, la sensibilità di questi test di screening è di circa l'80% per il 5% di falsi positivi. La diagnosi di aneuploidia viene quindi stabilita su una popolazione classificata ad alto rischio, mediante un cariotipo fetale (che richiede una procedura invasiva: biopsia del trofoblasto o amniocentesi). Uno screening positivo aumenta l'ansia materna e medica. Inoltre, l'inappropriata combinazione dei test è all'origine di numerose inutili procedure invasive (tasso nazionale di amniocentesi dell'11%), a rischio di perdite fetali (0,5 su 1%). Questa inflazione di procedure invasive porta a tante perdite di bambini non affetti come bambini trisomici ea una mal conosciuta morbilità materna.

Diversi studi hanno mostrato che il 10% del DNA libero trovato dal primo trimestre di gravidanza nel plasma materno è di origine fetale e che questo DNA è specifico del DNA nucleare fetale della gravidanza in corso. Ciò ha aperto la strada ad una possibile diagnosi prenatale non invasiva dell'aneuploidia fetale che si è scontrata negli ultimi 10 anni con le performance limitate dall'isolamento e dal sequenziamento del DNA fetale nel plasma materno. Una nuova tecnica di analisi per sequenziamento a banda larga del DNA circolante nel sangue materno per la diagnosi dell'aneuploide più frequente di cui è stata riportata la trisomia 21. L'High-output shotgun sequencing di tutto il DNA circolante nel sangue materno, quindi la lettura e l'identificazione di tutte le sequenze cromosomiche permette di analizzare la quantità di DNA risultante dal cromosoma soprannumerario, senza necessità di differenziare DNA materno e fetale. Sulla base di recentissimi lavori 10, questo eccesso di sequenze risultanti specificatamente dal soprannumerario fetale del cromosoma 21 permette una discriminazione completa tra trisomia 21 e disomia 21. Tuttavia, questo studio ha analizzato solo 9 casi di trisomia 21 ei prelievi di sangue materno sono stati realizzati dopo l'amniocentesi o la coriocentesi, cosa che potrebbe aver aumentato artificialmente la quantità di DNA fetale circolante.

Obiettivi :

Dimostrare che l'High output shotgun sequencing del DNA fetale nel sangue materno potrebbe consentire una completa discriminazione tra le madri di un feto trisomico 21 o di un feto DISOMIQUE 21 dal primo trimestre di gravidanza, e quindi di ottenere un'alternativa affidabile nel trattamento invasivo procedura.

Metodo Due centri pubblici di screening prenatale sono stati istituiti per rispondere specificamente alle raccomandazioni dell'Alta Autorità di Sanità e hanno la capacità di effettuare 20.000 atti di screening all'anno. Tutte le donne ad alto rischio (> 1/250) di aneuploidia e le candidate ad una procedura invasiva, vedranno suggerire la partecipazione allo studio. I pazienti inclusi avranno un campione di sangue materno prima del test invasivo. Tale prelievo verrà messo in attesa a -80°C previa centrifugazione seguendo il protocollo consigliato. Al termine dell'inclusione, la tecnica di analisi del DNA circolante sarà realizzata poi alla cieca dal laboratorio su tutti i casi diagnosticati (mediante esame invasivo abituale, oa conclusione della gravidanza) di trisomia 21 e su controlli rappresentativi di tutti lo spettro dei livelli di rischio. Verrà realizzato uno studio di riproducibilità della quantificazione del DNA del cromosoma 21.

Numero di soggetti:

si prevede di includere 75 casi di trisomia 21 e 150 casi di controllo con cariotipo normale, ciò che consente di rilevare una sensibilità del 99,9% e una specificità del 99,99% con una potenza di almeno il 95%.

Durata dello studio:

questi obiettivi sono realizzabili in due anni sulla base del numero di prelievi invasivi realizzati in entrambi i centri e di uno studio già realizzato

Aspetti etici: ricerca sui dati e raccolta biologica. Nessuna decisione medica individuale sarà presa in base al test stimato.

Prospettive:

questa nuova tecnica, se è generalizzabile, permetterebbe di limitare il numero di procedure di diagnosi invasiva (amniocentesi e coriocentesi) che contengono un rischio significativo di gravi complicanze materne e fetali, ottimizzando le capacità di questo screening.