Trisomie von Chromosom 21 Diagnose durch Hochleistungssequenzierung (SEQ21)

Begründung der Untersuchung:

Die Trisomie 21 ist die häufigste Ursache für eine genetisch bedingte Behinderung mit einer Inzidenz von 1,3/1 000 Geburten, die mit dem Alter der Mutter zunimmt. Mehrere Strategien des vorgeburtlichen Screenings wurden entwickelt. Die Hohe Gesundheitsbehörde hat kürzlich empfohlen, schwangeren Frauen ein kombiniertes 1. Trimester-Screening vorzuschlagen, das zwischen der 11+0- und 13+6-Woche der Amenorrhoe durchgeführt wird und das Maß der NUCALE-Transparenz und die Dosierung im mütterlichen Serum verbindet: PAPP-A (Pregnancy Associated Plasmaprotein A) und βhCG (freies humanes β-Choriongonadotropin des 1. Trimesters). Allerdings liegt die Sensitivität dieser Suchtests bei etwa 80 % für 5 % positiv falsch. Die Diagnose einer Aneuploidie wird dann anhand eines fötalen Karyotyps (der ein invasives Verfahren erfordert: Biopsie des Trophoblasten oder Amniozentese) bei einer als Hochrisiko eingestuften Population gestellt. Ein positives Screening erhöht die mütterliche und medizinische Angst. Darüber hinaus ist die unangemessene Kombination der Tests der Ursprung zahlreicher nutzloser invasiver Verfahren (nationale Amniozenteserate von 11 %), bei denen das Risiko von fötalen Verlusten (0,5 in 1 %) besteht. Diese Inflation invasiver Verfahren führt zu so vielen Verlusten nicht betroffener Kinder als trisomatische Kinder und zu einer schlecht bekannten mütterlichen Morbidität.

Mehrere Studien zeigten, dass 10 % der im mütterlichen Plasma gefundenen freien DNA aus dem ersten Viertel der Schwangerschaft fetalen Ursprungs ist und dass diese DNA spezifisch für die fötale Kern-DNA der aktuellen Schwangerschaft ist. Dies eröffnete den Weg für eine mögliche nicht invasive pränatale Diagnostik der fetalen Aneuploidie, die in den letzten 10 Jahren mit den durch die Isolierung und die Sequenzierung der fetalen DNA im mütterlichen Plasma begrenzten Leistungen kollidierte. Eine neue Analysetechnik durch Breitbandsequenzierung der im mütterlichen Blut zirkulierenden DNA zur Diagnose des häufigsten Aneuploiden, dessen Trisomie 21 zurückgebracht wurde (berichtet). Die High-Output-Shotgun-Sequenzierung der gesamten im mütterlichen Blut zirkulierenden DNA, die anschließende Ablesung und Identifizierung aller Chromosomensequenzen ermöglicht die Analyse der DNA-Menge, die sich aus dem überzähligen Chromosom ergibt, ohne dass eine Unterscheidung zwischen mütterlicher und fötaler DNA erforderlich ist. Auf der Grundlage sehr neuer Arbeiten 10 ermöglicht dieser Überschuss an Sequenzen, die spezifisch aus den fetalen Überzähligen des Chromosoms 21 resultieren, eine vollständige Unterscheidung zwischen Trisomie 21 und Disomie 21. Diese Studie analysierte jedoch nur 9 Fälle von Trisomie 21 und die Entnahme von mütterlichem Blut wurde nach der Amniozentese oder der Choriozentese durchgeführt, was die Menge an zirkulierender fötaler DNA künstlich erhöht haben könnte.

Ziele :

Demonstrieren Sie, dass die High-Output-Shotgun-Sequenzierung der fötalen DNA im mütterlichen Blut eine vollständige Unterscheidung zwischen den Müttern eines trisomischen Fötus 21 oder eines DISOMIQUE-Fötus 21 aus dem ersten Viertel der Schwangerschaft ermöglichen könnte, und erhalten Sie so eine zuverlässige Alternative invasiv Verfahren.

Methode Zwei öffentliche Zentren für vorgeburtliche Vorsorgeuntersuchungen wurden speziell auf die Empfehlungen der Hohen Gesundheitsbehörde hin eingerichtet und verfügen über die Kapazität, 20 000 Vorsorgeuntersuchungen pro Jahr durchzuführen. Alle Frauen, die ein hohes Risiko (> 1/250) für Aneuploidie aufweisen, und die Kandidaten für ein invasives Verfahren, erhalten einen Vorschlag zur Teilnahme an der Studie. Den eingeschlossenen Patientinnen wird vor dem invasiven Test eine mütterliche Blutprobe entnommen. Diese Entnahme wird nach der Zentrifugation gemäß dem empfohlenen Protokoll bei –80 °C ausgesetzt. Am Ende der Aufnahme wird die Technik der Analyse der zirkulierenden DNA dann blind durch das Labor bei allen diagnostizierten Fällen (durch übliche invasive Untersuchung oder am Ende der Schwangerschaft) von Trisomie 21 und bei einer für alle repräsentativen Kontrolle durchgeführt das Gespenst der Risikostufen. Eine Studie zur Reproduzierbarkeit der Quantifizierung der DNA des Chromosoms 21 wird durchgeführt.

Anzahl der Fächer:

Wir planen, 75 Fälle von Trisomie 21 und 150 Kontrollfälle mit normalem Karyotyp einzuschließen, was es ermöglicht, eine Sensibilität von 99,9 % und eine Spezifität von 99,99 % mit einer Aussagekraft von mindestens 95 % zu erkennen.

Dauer des Studiums:

Diese Ziele sind in zwei Jahren auf der Grundlage der Anzahl der in beiden Zentren durchgeführten invasiven Entnahmen und einer bereits durchgeführten Studie realisierbar

Ethische Aspekte: Datenforschung und biologische Sammlung. Gemäß dem geschätzten Test wird keine individuelle medizinische Entscheidung getroffen.

Perspektiven:

Diese neue Technik würde, wenn sie verallgemeinerbar ist, es ermöglichen, die Anzahl der invasiven Diagnoseverfahren (Amniozentese und Choriozentese), die ein erhebliches Risiko schwerwiegender mütterlicher und fötaler Komplikationen beinhalten, zu begrenzen und gleichzeitig die Kapazitäten dieses Screenings zu optimieren.